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怎么都行

银虫 (小有名气)

[求助] 这弥散带该咋办呢?

本人扩增基因组里的一段序列,用基因组DNA扩增得到的产物总是很弱(上图),再用此产物做模板扩增,无论是不稀释还是稀释十倍,得到的全是弥散带。请各路高手给支个招吧,怎么才能把这片段完好的扩增出来。


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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
怎么都行(金币+3): 2011-08-16 10:45:16
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-08-16 11:44:36
第一张图的pcr特异性还不错,可以直接过柱回收,不用切胶,这个亮度我做过很多次。
二次扩增就是第一次看不见条带,我一般也要稀释500倍,不然极易出现上述拖尾。
How about the future?
2楼2011-08-16 09:25:42
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
怎么都行(金币+3): 2011-08-16 10:45:23
西瓜(金币+2): 依然活跃啊 2011-08-16 11:44:48
楼主得到后的PCR产物做模板,回收时也可能含有其他杂带,在扩增的话,稀释倍数是不是需加大些!能不能稀释100,1000倍在试一下!
jiayoubashaonian
3楼2011-08-16 09:26:55
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sunshinewzy

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 欢迎新虫啊~奖励从重,嘿嘿 2011-08-16 11:45:14
我做PCR也出现过弥散的现象,但是不如楼主严重,建议也是降低二次PCR时的模板量
4楼2011-08-16 11:00:47
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lalafeng

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good! 2011-08-16 11:45:24
做一个模板浓度梯度pcr吧,浓度太高或太低可能pcr效果都不好,加油!
充实每一天,学会自控
5楼2011-08-16 11:04:13
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lalafeng

银虫 (小有名气)

西瓜: 发一次就好啦 2011-08-16 11:45:44
做一个模板浓度梯度pcr吧,浓度太高或太低可能pcr效果都不好,加油!
充实每一天,学会自控
6楼2011-08-16 11:06:26
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