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怎么都行

银虫 (小有名气)

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[求助] 这弥散带该咋办呢？

本人扩增基因组里的一段序列，用基因组DNA扩增得到的产物总是很弱（上图），再用此产物做模板扩增，无论是不稀释还是稀释十倍，得到的全是弥散带。请各路高手给支个招吧，怎么才能把这片段完好的扩增出来。

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1楼 2011-08-16 09:07:01

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w2boluo

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
怎么都行(金币+3): 2011-08-16 10:45:16
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-08-16 11:44:36

第一张图的pcr特异性还不错，可以直接过柱回收，不用切胶，这个亮度我做过很多次。
二次扩增就是第一次看不见条带，我一般也要稀释500倍，不然极易出现上述拖尾。

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How about the future？

2楼2011-08-16 09:25:42

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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★
怎么都行(金币+3): 2011-08-16 10:45:23
西瓜(金币+2): 依然活跃啊 2011-08-16 11:44:48

楼主得到后的PCR产物做模板，回收时也可能含有其他杂带，在扩增的话，稀释倍数是不是需加大些！能不能稀释100，1000倍在试一下！

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jiayoubashaonian

3楼2011-08-16 09:26:55

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sunshinewzy

木虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 欢迎新虫啊~奖励从重，嘿嘿 2011-08-16 11:45:14

我做PCR也出现过弥散的现象，但是不如楼主严重，建议也是降低二次PCR时的模板量

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4楼2011-08-16 11:00:47

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lalafeng

银虫 (小有名气)

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★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good！ 2011-08-16 11:45:24

做一个模板浓度梯度pcr吧，浓度太高或太低可能pcr效果都不好，加油！

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充实每一天，学会自控

5楼2011-08-16 11:04:13

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lalafeng

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西瓜: 发一次就好啦 2011-08-16 11:45:44

做一个模板浓度梯度pcr吧，浓度太高或太低可能pcr效果都不好，加油！

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充实每一天，学会自控

6楼2011-08-16 11:06:26

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