应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于qRT-PCR
101/1返回列表
查看: 1242  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yafang21

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于qRT-PCR

最近在做qRT-PCR， 设计了几对引物（根据CDS序列设计的），在cDNA中扩增不出目的条带（但是有其他片段的杂带，比目的片段长300-400bp，只有一条），但在基因组中可以顺利扩增出一条很亮的很好的目的条带。这种情况已经出现在好几对引物身上了，难道是在信使RNA的内含子剪切之后的RNA编辑又加进去那么长的片段？感觉这个不太可能。求大虾指点迷津~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-15 08:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助。最近很活跃哈 2011-08-15 13:06:28
yafang21(金币+1): 2011-08-20 09:17:12
楼主的内参基因能扩出来吗？材料是原核还是真核？可能楼主的模板不太好！
赞一下(1人) 回复此楼
jiayoubashaonian
2楼2011-08-15 08:45:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yafang21

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by yafang21 at 2011-08-15 08:03:45:
最近在做qRT-PCR， 设计了几对引物（根据CDS序列设计的），在cDNA中扩增不出目的条带（但是有其他片段的杂带，比目的片段长300-400bp，只有一条），但在基因组中可以顺利扩增出一条很亮的很好的目的条带。这种情况 ...

内参可以扩出来，且内参是跨内含子的，在cDNA和基因组中的条带均没问题，很清晰很好。我的材料是水稻叶片。好几个基因的好几个引物都出现同样的问题，觉得很郁闷
赞一下 回复此楼
3楼2011-08-15 09:08:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-08-15 13:06:37
yafang21(金币+1): 2011-08-20 09:17:34
如果你的基因表达量很低，那很可能出不来带
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-08-15 10:14:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yafang21

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shaquila at 2011-08-15 10:14:04:
如果你的基因表达量很低，那很可能出不来带

嗯！表达量低的话是没条带，这种情况下扩增出来的条带属于非特异性扩增吗？但是觉得非特异性扩增条带很亮，像是主条带
赞一下 回复此楼
5楼2011-08-15 10:19:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-15 08:45:19:
楼主的内参基因能扩出来吗？材料是原核还是真核？可能楼主的模板不太好！

哈哈，谢谢西瓜！最近实验安排的少些，来给论坛添砖加瓦！
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
6楼2011-08-15 13:09:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流~ 2011-08-15 13:18:30
yafang21(金币+1): 2011-09-30 15:11:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by yafang21 at 2011-08-15 09:08:10:
内参可以扩出来，且内参是跨内含子的，在cDNA和基因组中的条带均没问题，很清晰很好。我的材料是水稻叶片。好几个基因的好几个引物都出现同样的问题，觉得很郁闷

楼主的试剂盒用的谁的？Takara的？还是。。。？
赞一下(1人) 回复此楼
jiayoubashaonian
7楼2011-08-15 13:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-15 13:09:37:
哈哈，谢谢西瓜！最近实验安排的少些，来给论坛添砖加瓦！

呵呵，很热心啊！明天晚上Journal Club第一讲，有时间来交流交流啊~预告贴里面有文献的原文还有主讲人做的PPT，纳米生物学方面的：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3479917

[ Last edited by 西瓜 on 2011-8-15 at 17:28 ]
赞一下 回复此楼
8楼2011-08-15 13:19:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-08-15 13:19:58:
呵呵，很热心啊！晚上Journal Club第一讲，有时间来交流交流啊~预告贴里面有文献的原文还有主讲人做的PPT，纳米生物学方面的：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3479917

好的，多谢西瓜斑竹！
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
9楼2011-08-15 14:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yafang21

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-15 13:10:35:
楼主的试剂盒用的谁的？Takara的？还是。。。？

嗯 takara的
回复此楼
10楼2011-08-18 15:29:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yafang21 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +3 西山十月 2026-08-09 3/150 2026-08-09 19:39 by Tide man
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +7 Lanmanbaby 2026-08-09 13/650 2026-08-09 19:04 by 天神眷顾
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +3 布布和一二 2026-08-08 3/150 2026-08-08 18:15 by Lightingo
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:22 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:22 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:19 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 15:59 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭