应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于qRT-PCR
101/1返回列表
查看: 1250  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yafang21

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于qRT-PCR

最近在做qRT-PCR， 设计了几对引物（根据CDS序列设计的），在cDNA中扩增不出目的条带（但是有其他片段的杂带，比目的片段长300-400bp，只有一条），但在基因组中可以顺利扩增出一条很亮的很好的目的条带。这种情况已经出现在好几对引物身上了，难道是在信使RNA的内含子剪切之后的RNA编辑又加进去那么长的片段？感觉这个不太可能。求大虾指点迷津~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-15 08:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助。最近很活跃哈 2011-08-15 13:06:28
yafang21(金币+1): 2011-08-20 09:17:12
楼主的内参基因能扩出来吗？材料是原核还是真核？可能楼主的模板不太好！
赞一下(1人) 回复此楼
jiayoubashaonian
2楼2011-08-15 08:45:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yafang21

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by yafang21 at 2011-08-15 08:03:45:
最近在做qRT-PCR， 设计了几对引物（根据CDS序列设计的），在cDNA中扩增不出目的条带（但是有其他片段的杂带，比目的片段长300-400bp，只有一条），但在基因组中可以顺利扩增出一条很亮的很好的目的条带。这种情况 ...

内参可以扩出来，且内参是跨内含子的，在cDNA和基因组中的条带均没问题，很清晰很好。我的材料是水稻叶片。好几个基因的好几个引物都出现同样的问题，觉得很郁闷
赞一下 回复此楼
3楼2011-08-15 09:08:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-08-15 13:06:37
yafang21(金币+1): 2011-08-20 09:17:34
如果你的基因表达量很低，那很可能出不来带
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-08-15 10:14:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yafang21

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shaquila at 2011-08-15 10:14:04:
如果你的基因表达量很低，那很可能出不来带

嗯！表达量低的话是没条带，这种情况下扩增出来的条带属于非特异性扩增吗？但是觉得非特异性扩增条带很亮，像是主条带
赞一下 回复此楼
5楼2011-08-15 10:19:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-15 08:45:19:
楼主的内参基因能扩出来吗？材料是原核还是真核？可能楼主的模板不太好！

哈哈，谢谢西瓜！最近实验安排的少些，来给论坛添砖加瓦！
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
6楼2011-08-15 13:09:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流~ 2011-08-15 13:18:30
yafang21(金币+1): 2011-09-30 15:11:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by yafang21 at 2011-08-15 09:08:10:
内参可以扩出来，且内参是跨内含子的，在cDNA和基因组中的条带均没问题，很清晰很好。我的材料是水稻叶片。好几个基因的好几个引物都出现同样的问题，觉得很郁闷

楼主的试剂盒用的谁的？Takara的？还是。。。？
赞一下(1人) 回复此楼
jiayoubashaonian
7楼2011-08-15 13:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-15 13:09:37:
哈哈，谢谢西瓜！最近实验安排的少些，来给论坛添砖加瓦！

呵呵，很热心啊！明天晚上Journal Club第一讲，有时间来交流交流啊~预告贴里面有文献的原文还有主讲人做的PPT，纳米生物学方面的：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3479917

[ Last edited by 西瓜 on 2011-8-15 at 17:28 ]
赞一下 回复此楼
8楼2011-08-15 13:19:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-08-15 13:19:58:
呵呵，很热心啊！晚上Journal Club第一讲，有时间来交流交流啊~预告贴里面有文献的原文还有主讲人做的PPT，纳米生物学方面的：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3479917

好的，多谢西瓜斑竹！
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
9楼2011-08-15 14:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yafang21

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-15 13:10:35:
楼主的试剂盒用的谁的？Takara的？还是。。。？

嗯 takara的
回复此楼
10楼2011-08-18 15:29:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yafang21 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 19/950 2026-08-12 10:55 by 要乐观耀哥
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +5 Tide man 2026-08-11 5/250 2026-08-12 09:24 by kangban
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭