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yafang21

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于qRT-PCR

最近在做qRT-PCR， 设计了几对引物（根据CDS序列设计的），在cDNA中扩增不出目的条带（但是有其他片段的杂带，比目的片段长300-400bp，只有一条），但在基因组中可以顺利扩增出一条很亮的很好的目的条带。这种情况已经出现在好几对引物身上了，难道是在信使RNA的内含子剪切之后的RNA编辑又加进去那么长的片段？感觉这个不太可能。求大虾指点迷津~~~
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1楼 2011-08-15 08:03:45
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流~ 2011-08-15 13:18:30
yafang21(金币+1): 2011-09-30 15:11:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by yafang21 at 2011-08-15 09:08:10:
内参可以扩出来，且内参是跨内含子的，在cDNA和基因组中的条带均没问题，很清晰很好。我的材料是水稻叶片。好几个基因的好几个引物都出现同样的问题，觉得很郁闷

楼主的试剂盒用的谁的？Takara的？还是。。。？
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jiayoubashaonian
7楼2011-08-15 13:10:35
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助。最近很活跃哈 2011-08-15 13:06:28
yafang21(金币+1): 2011-08-20 09:17:12
楼主的内参基因能扩出来吗？材料是原核还是真核？可能楼主的模板不太好！
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jiayoubashaonian
2楼2011-08-15 08:45:19
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yafang21

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by yafang21 at 2011-08-15 08:03:45:
最近在做qRT-PCR， 设计了几对引物（根据CDS序列设计的），在cDNA中扩增不出目的条带（但是有其他片段的杂带，比目的片段长300-400bp，只有一条），但在基因组中可以顺利扩增出一条很亮的很好的目的条带。这种情况 ...

内参可以扩出来，且内参是跨内含子的，在cDNA和基因组中的条带均没问题，很清晰很好。我的材料是水稻叶片。好几个基因的好几个引物都出现同样的问题，觉得很郁闷
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3楼2011-08-15 09:08:10
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-08-15 13:06:37
yafang21(金币+1): 2011-08-20 09:17:34
如果你的基因表达量很低，那很可能出不来带
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4楼2011-08-15 10:14:04
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