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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于qRT-PCR
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yafang21

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于qRT-PCR

最近在做qRT-PCR， 设计了几对引物（根据CDS序列设计的），在cDNA中扩增不出目的条带（但是有其他片段的杂带，比目的片段长300-400bp，只有一条），但在基因组中可以顺利扩增出一条很亮的很好的目的条带。这种情况已经出现在好几对引物身上了，难道是在信使RNA的内含子剪切之后的RNA编辑又加进去那么长的片段？感觉这个不太可能。求大虾指点迷津~~~
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1楼 2011-08-15 08:03:45
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助。最近很活跃哈 2011-08-15 13:06:28
yafang21(金币+1): 2011-08-20 09:17:12
楼主的内参基因能扩出来吗？材料是原核还是真核？可能楼主的模板不太好！
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jiayoubashaonian
2楼2011-08-15 08:45:19
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yafang21

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by yafang21 at 2011-08-15 08:03:45:
最近在做qRT-PCR， 设计了几对引物（根据CDS序列设计的），在cDNA中扩增不出目的条带（但是有其他片段的杂带，比目的片段长300-400bp，只有一条），但在基因组中可以顺利扩增出一条很亮的很好的目的条带。这种情况 ...

内参可以扩出来，且内参是跨内含子的，在cDNA和基因组中的条带均没问题，很清晰很好。我的材料是水稻叶片。好几个基因的好几个引物都出现同样的问题，觉得很郁闷
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3楼2011-08-15 09:08:10
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-08-15 13:06:37
yafang21(金币+1): 2011-08-20 09:17:34
如果你的基因表达量很低，那很可能出不来带
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4楼2011-08-15 10:14:04
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yafang21

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shaquila at 2011-08-15 10:14:04:
如果你的基因表达量很低，那很可能出不来带

嗯！表达量低的话是没条带，这种情况下扩增出来的条带属于非特异性扩增吗？但是觉得非特异性扩增条带很亮，像是主条带
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5楼2011-08-15 10:19:29
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-15 08:45:19:
楼主的内参基因能扩出来吗？材料是原核还是真核？可能楼主的模板不太好！

哈哈，谢谢西瓜！最近实验安排的少些，来给论坛添砖加瓦！
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jiayoubashaonian
6楼2011-08-15 13:09:37
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流~ 2011-08-15 13:18:30
yafang21(金币+1): 2011-09-30 15:11:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by yafang21 at 2011-08-15 09:08:10:
内参可以扩出来，且内参是跨内含子的，在cDNA和基因组中的条带均没问题，很清晰很好。我的材料是水稻叶片。好几个基因的好几个引物都出现同样的问题，觉得很郁闷

楼主的试剂盒用的谁的？Takara的？还是。。。？
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jiayoubashaonian
7楼2011-08-15 13:10:35
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-15 13:09:37:
哈哈，谢谢西瓜！最近实验安排的少些，来给论坛添砖加瓦！

呵呵，很热心啊！明天晚上Journal Club第一讲，有时间来交流交流啊~预告贴里面有文献的原文还有主讲人做的PPT，纳米生物学方面的：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3479917

[ Last edited by 西瓜 on 2011-8-15 at 17:28 ]
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8楼2011-08-15 13:19:58
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-08-15 13:19:58:
呵呵，很热心啊！晚上Journal Club第一讲，有时间来交流交流啊~预告贴里面有文献的原文还有主讲人做的PPT，纳米生物学方面的：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3479917

好的，多谢西瓜斑竹！
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jiayoubashaonian
9楼2011-08-15 14:00:52
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yafang21

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-15 13:10:35:
楼主的试剂盒用的谁的？Takara的？还是。。。？

嗯 takara的
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10楼2011-08-18 15:29:03
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