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yafang21

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于qRT-PCR

最近在做qRT-PCR, 设计了几对引物(根据CDS序列设计的),在cDNA中扩增不出目的条带(但是有其他片段的杂带,比目的片段长300-400bp,只有一条),但在基因组中可以顺利扩增出一条很亮的很好的目的条带。这种情况已经出现在好几对引物身上了,难道是在信使RNA的内含子剪切之后的RNA编辑又加进去那么长的片段?感觉这个不太可能。求大虾指点迷津~~~
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
6楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-15 13:09:37:
哈哈,谢谢西瓜!最近实验安排的少些,来给论坛添砖加瓦!

呵呵,很热心啊!明天晚上Journal Club第一讲,有时间来交流交流啊~预告贴里面有文献的原文还有主讲人做的PPT,纳米生物学方面的:http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3479917

[ Last edited by 西瓜 on 2011-8-15 at 17:28 ]
8楼2011-08-15 13:19:58
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励应助。最近很活跃哈 2011-08-15 13:06:28
yafang21(金币+1): 2011-08-20 09:17:12
楼主的内参基因能扩出来吗?材料是原核还是真核?可能楼主的模板不太好!
jiayoubashaonian
2楼2011-08-15 08:45:19
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yafang21

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by yafang21 at 2011-08-15 08:03:45:
最近在做qRT-PCR, 设计了几对引物(根据CDS序列设计的),在cDNA中扩增不出目的条带(但是有其他片段的杂带,比目的片段长300-400bp,只有一条),但在基因组中可以顺利扩增出一条很亮的很好的目的条带。这种情况 ...

内参可以扩出来,且内参是跨内含子的,在cDNA和基因组中的条带均没问题,很清晰很好。我的材料是水稻叶片。好几个基因的好几个引物都出现同样的问题,觉得很郁闷
3楼2011-08-15 09:08:10
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励 2011-08-15 13:06:37
yafang21(金币+1): 2011-08-20 09:17:34
如果你的基因表达量很低,那很可能出不来带
4楼2011-08-15 10:14:04
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