24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2570  |  回复: 12
本帖产生 2 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

rainontime

新虫 (小有名气)

[求助] 求助 双酶切验证阳性克隆的问题

本人将某 2600bp的目的基因 和 pet28a载体 双酶切,切胶回收,T4连接酶4度过夜连接, 将10uL连接产物加到120uL感受态细胞中, 加入800uL无抗性培养基 摇菌50分钟, 涂平板10块,每块80uL, 过夜后,发现只长了一个菌落。。。挑取菌落培养,提取质粒,双酶切验证是否是阳性克隆,切成了两条片段,发现其中较短的那条片段比目的片段长!!!!!!!请问这是咋回事?谢谢!!!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)

只长一个斑,估计对的可能性也不大吧
6楼2011-08-02 10:45:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

duckcat

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

rainontime(金币+1): 不错的 2011-08-01 18:10:16
1949stone(MolEPI+1): 不错 不错 2011-08-01 20:31:33
这是很正常的,一般酶切后的目的片段往往比pcr扩增得到的跑胶拖后,主要有以下几个物理因素造成:
1,因为载体属于比较大的分子了,质粒如果浓度较高的话,难免分子间的作用力较强,因为这种力的存在导致了目的片段跑胶速度较慢!
2, 可能切得时间比较长,导致许多分子杂质增多!
3,如果很靠后的话极有可能你的凝胶浓度不均匀……

暂时想到这么多!
2楼2011-08-01 17:23:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by duckcat at 2011-08-01 17:23:48:
这是很正常的,一般酶切后的目的片段往往比pcr扩增得到的跑胶拖后,主要有以下几个物理因素造成:
1,因为载体属于比较大的分子了,质粒如果浓度较高的话,难免分子间的作用力较强,因为这种力的存在导致了目的片 ...

我用的是自己配的0.7%的胶,而且为了把条带拉开,跑了20分钟,因为片段比较大。。。。。。是不是这样也会导致位置偏移?谢谢!
3楼2011-08-01 18:08:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d1emon

铜虫 (初入文坛)


1949stone(金币+1): 有一定道理 2011-08-01 20:31:53
跑的时间有点短,这也有可能造成你说的情况
,pcr验证加酶切验证即可确定
4楼2011-08-01 19:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +23 hualkop 2026-04-12 25/1250 2026-04-16 22:12 by SUSE_CL
[考研] 0854求调剂 +21 门路摸摸 2026-04-15 24/1200 2026-04-16 21:24 by Art1977
[考研] 294求调剂 +14 淡然654321 2026-04-15 14/700 2026-04-16 21:01 by lpl364211
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 药学305求调剂 +7 玛卡巴卡boom 2026-04-11 7/350 2026-04-15 13:21 by 西北望—风沙
[考研] 材料专业344求调剂 +17 hualkop 2026-04-10 22/1100 2026-04-14 16:21 by sxdj2
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:37 by zs92450
[考研] 求调剂 +12 何气正 2026-04-13 13/650 2026-04-14 14:47 by zs92450
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-11 8/400 2026-04-14 09:04 by pengliang8036
[考研] 339求调剂 +4 hanwudada 2026-04-12 4/200 2026-04-13 12:03 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 调剂求助 +6 果然有我 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:22 by 明月此时有
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 0859,337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 11:34 by caotw2020
[考研] 368求调剂 +3 17385968172 2026-04-10 3/150 2026-04-10 20:12 by 电子奥德彪
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
信息提示
请填处理意见