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duckcat

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

rainontime(金币+1): 不错的 2011-08-01 18:10:16
1949stone(MolEPI+1): 不错 不错 2011-08-01 20:31:33
这是很正常的,一般酶切后的目的片段往往比pcr扩增得到的跑胶拖后,主要有以下几个物理因素造成:
1,因为载体属于比较大的分子了,质粒如果浓度较高的话,难免分子间的作用力较强,因为这种力的存在导致了目的片段跑胶速度较慢!
2, 可能切得时间比较长,导致许多分子杂质增多!
3,如果很靠后的话极有可能你的凝胶浓度不均匀……

暂时想到这么多!
2楼2011-08-01 17:23:48
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智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

1949stone(MolEPI+1): 来也 2011-08-01 20:32:03
1:连接体系不知道你选择的合适不,涂布了那么多板子怎么就长了一个单克隆,个人觉得你先从连接体系上着手,提高了连接的效率才能保证你做一次连接的成功率啊,你说是不?连接体系你先得定量看看你的载体和目的基因的量,如果量差不多的话,目的基因多加一些;当然了你要确定你的载体和基因酶切完全了;
2:至于验证嘛,很简单的,先把长出来的单克隆划到相同抗性的板子上,然后做一个PCR初步验证看看,如果能够P出来大小相同的一条带那很有可能就对了,然后再提取质粒进行酶切验证就OK了。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-08-01 19:59:14
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