| 查看: 4796 | 回复: 13 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
luolh2004金虫 (著名写手)
|
[求助]
细胞培养相关问题 急！！！！！
|
|
|
各位虫友们好啊，我现在进行Balb/c3T3细胞培养实验，现在遇到一系列麻烦事，特地向大家请教，谢谢了哦。 1.细胞培养使用的双抗溶液（购买的），有效期已经过了，还能够使用吗？因为没有注意到，我已经用了好长一段时间了。同样，如果类似R1640和DMEM培养基过期了，是不是就不能继续使用了？ 2.近期发现细胞状态非常不好，有很多死细胞，不管是刚复苏的细胞还是已经复苏一段时间的细胞，死细胞都很多。细胞生长速度没受什么影响，算是比较正常，就是不知道为什么会有那么多死细胞，实在是找不出什么原因。 3.我目前正在做hegf表皮细胞生长因子活性检测实验，使用的方法是MTT法，细胞是Balb/c3T3细胞，但是每次做的实验结果都发现，加入生长因子样品和标准品的数值没有维持培养基的高。希望有同样做这个实验的虫友们，给点意见，或者是有机会大家多多交流下，谢谢了。 MTT实验我已经做了大半年了，中间总是不断有问题出现，现在还是没有能完成，非常着急，有做过类似实验的虫友们，一定要帮帮我呀，非常感谢了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有15人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有14人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有7人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有8人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有10人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有15人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有13人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大鼠气管上皮细胞培养方法
已经有9人回复
- 急求 G418筛选相关问题
已经有4人回复
- 求助关于细胞培养的问题
已经有7人回复
- 有谁养过4T1细胞，请教培养方法！！！急！！
已经有1人回复
- 【求助/交流】[急]细胞培养出现问题，大家看看是不是传说中的黑胶虫？
已经有9人回复
- 【求助/交流】细胞培养污染问题
已经有19人回复
- 【求助/交流】293t细胞悬浮培养相关问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】请教细胞培养的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】细胞培养的问题
已经有9人回复
- 【求助】关于RAW 264.7细胞培养的问题 求助！！
已经有25人回复
- 求助血管内皮细胞培养问题（急）
已经有6人回复
aegeansyang
银虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 5517.1
- 散金: 1825
- 红花: 5
- 帖子: 856
- 在线: 724.4小时
- 虫号: 243919
- 注册: 2006-04-16
- 性别: GG
- 专业: 组织工程学
4楼2011-07-24 15:05:09
浪人利利
金虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1210.8
- 散金: 1128
- 红花: 2
- 帖子: 602
- 在线: 307.6小时
- 虫号: 445310
- 注册: 2007-10-28
- 专业: 代谢性疾病药物药理
【答案】应助回帖
luolh2004(金币+15): 非常感谢，我也有点怀疑是冻存的问题。我的是贴壁细胞，可以把上清去掉，还是谢谢你的回答 2011-07-24 23:54:10
|
1、不过期最好了，双抗过期不很久也没关系，培养基最好不要用过期的 2、通过你的描述，个人觉得你冻存的细胞可能都有问题（或者中间液氮干掉了，没及时补充） 3、没怎么理解你的意思 个人建议：细胞重新复苏，培养液重新制取，稍微比平时多加一点血清试试；细胞有碎片或者死细胞就及时PBS多洗几次，勤换培养液；虽然你的意思我没完全明白，但是MTT法测定时，96孔板我一般都不把培养液倒掉（防止悬浮细胞倒掉了），直接加MTT、DMSO等处理，然后震荡后直接测定数值；以上仅供参考  |
2楼2011-07-23 23:32:10
lw582482481
铜虫 (初入文坛)
- BioEPI: 2
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 149.9
- 红花: 3
- 帖子: 17
- 在线: 5.7小时
- 虫号: 1297263
- 注册: 2011-05-16
- 专业: 动物遗传学
【答案】应助回帖
luolh2004(金币+20): 谢谢你的回答，对我挺有用处的，建议也很好。 2011-07-24 23:56:12
|
1 双抗过期是没有问题的。低温保存适当的情况下没有差别。培养基过期的话，如果你买的是液体培养基，建议不要用了。如果是固体粉末自己配培养基，没有多大问题。 2 复苏之后死细胞过多，这个是你的细胞状态不好。也许是你在细胞长的过多的时候传代，这样不好（虽然没有养过你这种细胞）。另外就是可能你细胞在消化的时候受损严重，会有部分细胞死亡。而由于你细胞自身长的速度比较快，整体来说不受影响。 3 mtt不知道是啥？但是关于你的EGH的测定我想，这个蛋白是分泌型的，你在测数值的时候是否没有把胞外的那部分没有测定呢？ 4 关于你试验的问题，你的对照以及实验组是否完全一致，这个十分重要。二者的细胞密度以及生长条件之类的都很有影响。 最后，我建议你是在细胞状态调整好之后再做吧。因为细胞死的多，肯定是有问题的。在细胞生长得最旺盛的时候传代但是不能过多或者过少。维持2-6d传一次最好。还有细胞的消化一定要适当。 |
3楼2011-07-24 09:34:26
hgq115
金虫 (小有名气)
- BioEPI: 1
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1213.7
- 散金: 20
- 红花: 1
- 帖子: 274
- 在线: 86.1小时
- 虫号: 741583
- 注册: 2009-04-06
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
luolh2004(金币+20): 谢谢，说的挺有用的 2011-07-25 20:11:51
|
1、双抗过期影响不大的，只要不污染就行了，但是培液过期建议最好不用，本人发现过期培液容易造成pH不稳定，会对细胞生长造成很大影响。 2、我以前也出现过这样的问题，这应该是细胞自身的关系，很有可能是细胞在冻存的时候出现了问题，多传代几次后会慢慢减少。 3、我没做过MTT用来检测细胞因子活性的实验，但是做过很多检测细胞毒性和杀伤力的实验，本人觉得做MTT有以下几点特别需要注意：1. 加MTT时注意枪头不能插到孔底，免得损伤细胞，2、倒培液是要倒均匀，用枪吸的时候很容易导致细胞被吸走或者吸不均匀，我们自创了一种办法是将96孔板倒置在吸水纸上，再将96空斑倾斜几次，这样能比较均匀的吸走培液，效果挺不错。 |
5楼2011-07-25 08:29:48
50