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1289622木虫 (正式写手)
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[求助]
有谁养过4T1细胞，请教培养方法！！！急！！
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我最近买的的4T1细胞（小鼠乳腺癌细胞），生长情况很不好，在消化传代后，细胞瓶中细胞分散不均匀，长的一堆堆的。 而且用胰酶消化细胞时，细胞变圆不明显，反而有大片的细胞脱落，还有些细胞吹打不掉。 漂浮的细胞特别多，生长情况很不好。为什么会出现这种情况？怎么解决。 有谁养过这种细胞吗？培养此种细胞过程中需要什么特别注意的吗？有什么操作要注意的吗？还有培养液，胎牛血清，胰酶等有特别要求的吗？我用的胰酶是加EDTA的，消化的程度老是掌握不好，有影响吗？请不吝赐教，不胜感激！ [ Last edited by 1289622 on 2011-4-19 at 18:29 ] |
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【答案】应助回帖
1289622(金币+10, 博学EPI+1): 2011-06-28 09:21:29
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Protocol: NOTE: the cells should not be allowed to become confluent, subculture at 80% of confluence. Remove medium, and rinse with 0.25% trypsin-0.53mM EDTA solution. Remove the solution and add an additional 1 to 2 ml of trypsin-EDTA solution. Allow the flask to sit at room temperature (or at 37.0°C) until the cells detach. Add fresh culture medium, aspirate and dispense into new culture flasks. Subcultivation Ratio: A subcultivation ratio of 1:6 to 1:8 is recommended Medium Renewal: Every 2 to 3 days 本段摘自ATCC的4T1细胞说明，一个是不能让它聚团，一个是要用胰酶洗一次以后再消化，有的细胞洗一次之后消化效果就会好很多。 |
2楼2011-04-20 14:07:15