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luolh2004金虫 (著名写手)
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[求助]
细胞培养相关问题 急！！！！！
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各位虫友们好啊，我现在进行Balb/c3T3细胞培养实验，现在遇到一系列麻烦事，特地向大家请教，谢谢了哦。 1.细胞培养使用的双抗溶液（购买的），有效期已经过了，还能够使用吗？因为没有注意到，我已经用了好长一段时间了。同样，如果类似R1640和DMEM培养基过期了，是不是就不能继续使用了？ 2.近期发现细胞状态非常不好，有很多死细胞，不管是刚复苏的细胞还是已经复苏一段时间的细胞，死细胞都很多。细胞生长速度没受什么影响，算是比较正常，就是不知道为什么会有那么多死细胞，实在是找不出什么原因。 3.我目前正在做hegf表皮细胞生长因子活性检测实验，使用的方法是MTT法，细胞是Balb/c3T3细胞，但是每次做的实验结果都发现，加入生长因子样品和标准品的数值没有维持培养基的高。希望有同样做这个实验的虫友们，给点意见，或者是有机会大家多多交流下，谢谢了。 MTT实验我已经做了大半年了，中间总是不断有问题出现，现在还是没有能完成，非常着急，有做过类似实验的虫友们，一定要帮帮我呀，非常感谢了！ |
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hgq115
金虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
luolh2004(金币+20): 谢谢，说的挺有用的 2011-07-25 20:11:51
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1、双抗过期影响不大的，只要不污染就行了，但是培液过期建议最好不用，本人发现过期培液容易造成pH不稳定，会对细胞生长造成很大影响。 2、我以前也出现过这样的问题，这应该是细胞自身的关系，很有可能是细胞在冻存的时候出现了问题，多传代几次后会慢慢减少。 3、我没做过MTT用来检测细胞因子活性的实验，但是做过很多检测细胞毒性和杀伤力的实验，本人觉得做MTT有以下几点特别需要注意：1. 加MTT时注意枪头不能插到孔底，免得损伤细胞，2、倒培液是要倒均匀，用枪吸的时候很容易导致细胞被吸走或者吸不均匀，我们自创了一种办法是将96孔板倒置在吸水纸上，再将96空斑倾斜几次，这样能比较均匀的吸走培液，效果挺不错。 |
5楼2011-07-25 08:29:48