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luolh2004

金虫 (著名写手)

[求助] 细胞培养相关问题 急!!!!!

各位虫友们好啊,我现在进行Balb/c3T3细胞培养实验,现在遇到一系列麻烦事,特地向大家请教,谢谢了哦。
1.细胞培养使用的双抗溶液(购买的),有效期已经过了,还能够使用吗?因为没有注意到,我已经用了好长一段时间了。同样,如果类似R1640和DMEM培养基过期了,是不是就不能继续使用了?
2.近期发现细胞状态非常不好,有很多死细胞,不管是刚复苏的细胞还是已经复苏一段时间的细胞,死细胞都很多。细胞生长速度没受什么影响,算是比较正常,就是不知道为什么会有那么多死细胞,实在是找不出什么原因。
3.我目前正在做hegf表皮细胞生长因子活性检测实验,使用的方法是MTT法,细胞是Balb/c3T3细胞,但是每次做的实验结果都发现,加入生长因子样品和标准品的数值没有维持培养基的高。希望有同样做这个实验的虫友们,给点意见,或者是有机会大家多多交流下,谢谢了。
     MTT实验我已经做了大半年了,中间总是不断有问题出现,现在还是没有能完成,非常着急,有做过类似实验的虫友们,一定要帮帮我呀,非常感谢了!
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aegeansyang

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

luolh2004(金币+10): 我培养的是小鼠胚胎成纤维细胞,是贴壁的细胞,刚复苏的时候死细胞很多,复苏一段时间后死细胞就比较少点,但是还是觉得不正常的,死细胞比较多点 2011-07-24 23:58:09
不知你细胞是接种的时候就出现大量的不贴壁细胞呢,还是培养一段时间后开始出现细胞死亡呢?
如果是前者,可能你的消化过程存在问题;而后者的话可能是培养基有问题了
4楼2011-07-24 15:05:09
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