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luolh2004金虫 (著名写手)
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[求助]
细胞培养相关问题 急！！！！！
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各位虫友们好啊，我现在进行Balb/c3T3细胞培养实验，现在遇到一系列麻烦事，特地向大家请教，谢谢了哦。 1.细胞培养使用的双抗溶液（购买的），有效期已经过了，还能够使用吗？因为没有注意到，我已经用了好长一段时间了。同样，如果类似R1640和DMEM培养基过期了，是不是就不能继续使用了？ 2.近期发现细胞状态非常不好，有很多死细胞，不管是刚复苏的细胞还是已经复苏一段时间的细胞，死细胞都很多。细胞生长速度没受什么影响，算是比较正常，就是不知道为什么会有那么多死细胞，实在是找不出什么原因。 3.我目前正在做hegf表皮细胞生长因子活性检测实验，使用的方法是MTT法，细胞是Balb/c3T3细胞，但是每次做的实验结果都发现，加入生长因子样品和标准品的数值没有维持培养基的高。希望有同样做这个实验的虫友们，给点意见，或者是有机会大家多多交流下，谢谢了。 MTT实验我已经做了大半年了，中间总是不断有问题出现，现在还是没有能完成，非常着急，有做过类似实验的虫友们，一定要帮帮我呀，非常感谢了！ |
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浪人利利
金虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
luolh2004(金币+15): 非常感谢，我也有点怀疑是冻存的问题。我的是贴壁细胞，可以把上清去掉，还是谢谢你的回答 2011-07-24 23:54:10
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1、不过期最好了，双抗过期不很久也没关系，培养基最好不要用过期的 2、通过你的描述，个人觉得你冻存的细胞可能都有问题（或者中间液氮干掉了，没及时补充） 3、没怎么理解你的意思 个人建议：细胞重新复苏，培养液重新制取，稍微比平时多加一点血清试试；细胞有碎片或者死细胞就及时PBS多洗几次，勤换培养液；虽然你的意思我没完全明白，但是MTT法测定时，96孔板我一般都不把培养液倒掉（防止悬浮细胞倒掉了），直接加MTT、DMSO等处理，然后震荡后直接测定数值；以上仅供参考  |
2楼2011-07-23 23:32:10