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初做DGGE求助论坛高手
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初做DGGE，电泳图如下 现在的问题是： 1.我所需要的目的条带的位置是不是在电泳图中间部分的条带？ 2.电泳图下面的那几条亮带是什么条带？要不要割胶回收？ 3.电泳图上所显示的条带较少是不是提基因组的时候就出现了问题呢？ 4.拍照时照片曝光时间长，割胶回收时，有些条带非常暗基本看不见，是不是要提高上样量呢？ 问题比较多啊？希望各位高手多多回复   |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
jipojiong(金币+10): 2011-07-15 15:15:53
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
jipojiong(金币+10): 2011-07-15 15:15:53
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首先可以肯定这事一个比较失败的结果，建议重新做DGGE，可以从PCR那里找原因，不知你PCR的结果如何，DGGE要求PCR结果比较好，不要有杂带，条带也不要过宽。最好是切胶纯化下。 前6个泳道是分离的单菌？为什么有的泳道还会有多条带？单菌应该只含有一条带，最多就是再有个引物二聚体。这种情况可能是pcr时候污染了，也可能是泳道的样品扩散到相邻泳道导致的。建议重新PCR，如果泳道够用，建议不同样品间空一个泳道加样试试。 另外，土壤中微生物的种类非常丰富，绝对不会只有这么几条带。原因可能是电泳条件不合适，我做土壤一般是15h－16h，75v，当然，这个条件也不是唯一的，需要摸索一下。另外也有可能是你的PCR产物浓度太低，建议你多扩几管合并一下（但是这样容易造成背景难看）。另外建议你做巢式PCR，效果还是不错的。 最下面几条亮带不知道是什么 |
7楼2011-07-11 17:54:13
2楼2011-07-08 22:15:25
3楼2011-07-09 12:48:25
4楼2011-07-10 09:15:53
