应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » puf酶与普通Taq酶混用PCR问题
51/1返回列表
查看: 4115  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

mahoumeimei

金虫 (小有名气)

[求助] puf酶与普通Taq酶混用PCR问题

之前用普通Taq酶做的PCR，目的条带比较单一而且很亮，因为要做A/T克隆测序，担心普通Taq酶会导致突变，所以将puf与Taq按1:2混合使用，结果P不出来。请问各位高手，我该作何调整？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-29 10:40:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-06-29 19:03:45
P不出来不好说，但是如果做T/A克隆到话，加Pfu酶不行啊。Pfu酶有3'至5'的外切酶活性（校正功能的来源），会把产物末端的A切掉的，做不了T/A克隆。
T/A克隆接触不多，等高人解答吧
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-29 10:52:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

liucong046

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-06-29 19:03:37
mahoumeimei(金币+2): 谢谢 2011-07-01 10:59:16
我没有将两种酶混合液用过，我想这样肯定有问题。takara公司的pfu是平末端的，我给你个建议，你可以试试全式金公司的HIFI酶。是高保真的而且也可以直接用于A/T克隆！！祝你好运！
赞一下(1人) 回复此楼
微生物分子生物学
2楼2011-06-29 10:47:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 这个貌似有点险 2011-06-29 19:04:11
引用回帖:
Originally posted by mahoumeimei at 2011-06-29 10:40:53:
之前用普通Taq酶做的PCR，目的条带比较单一而且很亮，因为要做A/T克隆测序，担心普通Taq酶会导致突变，所以将puf与Taq按1:2混合使用，结果P不出来。请问各位高手，我该作何调整？
[eimg]66/e7/1258265_1309315315 ...

用个高保真酶就是了，高保真酶扩增的速度会比普通酶的稍慢点，但是没必要那么急嘛，就让它扩增去好了，混合是可以的，比例哇要你自己去discovery~你设置几个比例试试看哇~应该有扩增出来的，对了，你扩增的片段是不是很长( ⊙o⊙ )哇~
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-06-29 10:57:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
1949stone(金币+1): 有需要一般会有公司生产 2011-06-29 19:05:10
引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-06-29 10:57:32:
用个高保真酶就是了，高保真酶扩增的速度会比普通酶的稍慢点，但是没必要那么急嘛，就让它扩增去好了，混合是可以的，比例哇要你自己去discovery~你设置几个比例试试看哇~应该有扩增出来的，对了，你扩增的片段 ...

一般高保真酶的proof reading靠的就是5’到3‘外切酶活性，都会把A切掉的。不知道有什么酶保真性高，然后又能留个A做T/A克隆？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-29 11:28:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 303求调剂 +4 睿08 2026-03-17 6/300 2026-03-18 11:01 by Iveryant
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 8/400 2026-03-17 19:03 by Wangjingyue
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭