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hanhaixingyun

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！简单易行啊。 2011-06-29 16:42:54
mahoumeimei(金币+5): 谢谢你的建议 2011-07-01 11:00:33

好像有保真性高还能加A的，具体既不清楚了。
不过你可以用高保真的做，最后72度10min中的时候停止，加入普通taq再运行，应该可以加A
还有就是序列有多大，如果没有超过1K，一般普通taq问题都不打

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6楼2011-06-29 11:42:10

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-06-29 12:51:27
mahoumeimei(金币+2): 我知道有那种plus的酶，不过实验室刚好有puf和普通Taq，就直接混着用了 2011-07-01 11:04:23

为什么要两者混合呢？
直接买个Taq plus酶不就可以了，taq plus酶是将taq酶和pfu混合得到。。。。
这个酶保真性很高。。。

Taq Plus DNA Polymerase是Taq和pfu DNA Polymerase按照一定
比例混合的酶，具有5'→3'聚合酶活性、双链DNA特异性的5'→3'外切酶
活性和3'→5'外切酶活性。其PCR产物为部分A末端，可直接连接到T/A
克隆载体；或者纯化后加A末端再连接，以提高连接效率。
Taq Plus DNA Polymerase 扩增效率高于单一的Taq DNA
Polymerase或者pfu DNA Polymerase，简单模板可以扩增长达15kb，复
杂模板可达10 kb ；保真性介于Taq DNA Polymerase 和pfu DNA
Polymerase之间。

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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!

9楼2011-06-29 12:08:04

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