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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切条带模糊?
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xwsooo

银虫 (小有名气)

[求助] 酶切条带模糊?

如题，酶切后跑电泳，110V左右，55mA左右，30min左右，酶切条带分别为120，100bp左右，最近感觉酶切的条带电泳后总感觉不太清晰（如下图所示：M-MARKER,1,2,3分别代表三种不同基因型，1包含酶切位点，3不含酶切位点，2为杂和子，其中3大小与PCR产物大小一样，电泳液也重新换过了，似乎没啥变化，（PS:最近电泳仪有些奇怪，以前都是恒压工作模式，最近变成了恒流模式，电压比以往小10多伏）。
求教，该怎么办呢？
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1楼 2011-06-23 15:18:44
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

xwsooo(金币+1): 2011-06-23 22:37:23
xwsooo(金币+1): 这个是给第二个帖子的金币：） 2011-06-24 09:51:49
电泳时，由于电泳体系是不断变化的，恒压或恒流只能选择其一。选择恒压时，电流一般会随着电泳不断增大。当电流大于设定的最大值时，电泳仪会自动转成恒流模式。这是电泳仪的保护机制。
看电泳效果如何，看Marker就可以了（你的酶切产物我是没看出什么不妥）。后面两张图marker都跑弯了，我觉得还是缓冲液的问题，有没有重新配缓冲液试过呢？

另外，也可以查看下电泳仪的电流参数，看是不是比以前设的更小了。或者干脆是有人由恒压改成了恒流……
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2楼2011-06-23 19:35:54
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-06-23 19:35:54:
电泳时，由于电泳体系是不断变化的，恒压或恒流只能选择其一。选择恒压时，电流一般会随着电泳不断增大。当电流大于设定的最大值时，电泳仪会自动转成恒流模式。这是电泳仪的保护机制。
看电泳效果如何，看Marke ...

谢谢，补充一下你不觉得我的酶切条带不清晰吗？
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3楼2011-06-23 22:38:41
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2011-06-23 22:38:41:
谢谢，补充一下你不觉得我的酶切条带不清晰吗？

不知道你说的不清晰是指什么……有没有你认为清晰的图？传上来比较下看看嘛。
你看看会不会是拍照时焦距没调好……可能别人调过了，你自己下次拍胶时仔细调调看。
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4楼2011-06-23 23:25:06
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