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丫头7976

铜虫 (正式写手)

[交流] PET-28a C末端his标签

我想用PET-28a的 C末端his标签，不用N端的his标签，那么把我的目的片段插入到
NCOI和Hind III之间，这样就把N断的his-tag，T7-Tag切掉了，不知道这样会不会影响我的膜蛋白表达，请高手指点。谢谢
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1楼 2011-06-17 09:46:38
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
丫头7976(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-18 10:40:26
这样做不影响表达的，但前提是你的目标蛋白适合这个系统表达。
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2楼2011-06-17 10:58:56
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丫头7976

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-17 10:58:56:
这样做不影响表达的，但前提是你的目标蛋白适合这个系统表达。

谢谢啊 这个得做一下才知道是不适合我的膜蛋白表达，再向你请教一个问题，载体中的T7-tag 或S-tag有什么作者用呢？
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3楼2011-06-17 14:34:02
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
丫头7976(金币+2): 哦 明白了 谢谢啊 2011-06-18 07:57:44
引用回帖:
Originally posted by 丫头7976 at 2011-06-17 14:34:02:
谢谢啊 这个得做一下才知道是不适合我的膜蛋白表达，再向你请教一个问题，载体中的T7-tag 或S-tag有什么作者用呢？

T7-tag 用来做western分子杂交的，相当于抗原，有专门的T7 tag标签抗体可以和它结合。
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4楼2011-06-17 14:51:52
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-17 18:50:52
丫头7976(金币+1): S-tag是PET-30中的标签，估计和你说的T7-tag有类似的作用吧 2011-06-18 07:58:41
S-tag没听说过，His-tag是纯化标签，镍柱亲和层析。
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5楼2011-06-17 14:54:40
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 一并奖励了！ 2011-06-18 10:40:57
丫头7976(金币+3): 谢谢啊 我一直想了解这个 终于找到资料了 谢谢啊 2011-06-19 19:56:48
引用回帖:
Originally posted by 丫头7976 at 2011-06-17 14:34:02:
谢谢啊 这个得做一下才知道是不适合我的膜蛋白表达，再向你请教一个问题，载体中的T7-tag 或S-tag有什么作者用呢？

S-TAG也是纯化标签，不是分子鉴定标签。

看看这个：http://biogefahr.blog.sohu.com/118718539.html
pET30 上 S tag的渊源
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6楼2011-06-18 10:03:56
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好表达量和N端是HIS有区别吗？
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7楼2015-06-07 22:51:47
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丫头7976

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hajierlove at 2015-06-07 22:51:47
你好表达量和N端是HIS有区别吗？

有很大区别 不同蛋白也不一样
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8楼2015-06-09 12:51:13
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 丫头7976 at 2015-06-09 12:51:13
有很大区别 不同蛋白也不一样...

表达量低了或者不表达了，怎么办

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2015-06-09 13:33:14
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 丫头7976 at 2015-06-09 12:51:13
有很大区别 不同蛋白也不一样...

你是怎么处理的，我的his标签之前是N端的,现在换成C端的啦

[ 发自小木虫客户端 ]
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10楼2015-06-09 13:34:33
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