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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 丝状真菌提取总DNA问题
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cclday

银虫 (正式写手)

[求助] 丝状真菌提取总DNA问题

CTAB法提取真菌DNA最后用异丙醇沉淀后使用无菌水无法完全溶解沉淀，这事怎么回事？

[ Last edited by cclday on 2011-6-14 at 08:39 ]
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1楼 2011-06-14 07:58:51
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-14 19:00:12
2.4.14.1真菌总DNA的提取
（1）接种菌株至液体培养基中，28℃，180rpm振荡培养3天；
（2）用灭菌纱布过滤，并压干菌体；
（3）将菌丝体倒入研钵（灭菌并预冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末状；
（4）将粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液；
（5）加等体积苯酚/氯仿，轻轻倒转混合，10000rpm离心10min；
（6）取400µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重复步骤（5）；
（7）取上清液，加入两倍体积无水乙醇，-20℃放置30min；
（8）10000rpm 离心10min，75%乙醇洗沉淀2次，真空干燥；
（9）以20µL 1×TE 溶解沉淀；
（10）电泳检测总DNA的浓度。

（5）DNA抽提液的配置
表 2.5  DNA抽提液的配置
成分        浓度
NaCl        200mmol/L
EDTA-Na2        4mmol/L
SDS        2%
Tris-HCl(pH=8.0)        100mmol/L
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-06-14 17:09:56
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
µL  是发上来之后出现的乱码，微升
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6楼2011-06-14 17:11:22
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
Originally posted by liuyu_sdili at 2011-06-15 16:40:43:
我也要做真菌方面的课题，不知道氯化苄法行不行,请指教~~~~

我对这个方法不了解，第一次听说，所以就查了一下，不敢说我查到的东西是真的或者是最好的，就说一下我的想法：这个方法太浪费时间了，单单是破碎细胞就要保温一个小时！而且操作也不比我用的方法简单，试剂也不省，实在不适合我用，但不是说不适合别人用。这些也只是我的想法，别人怎么看我就不知道了。

http://www.ceps.com.tw/ec/ecjnlarticleView.aspx?atliid=435190
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10楼2011-06-15 17:03:09
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
2389510楼: Originally posted by yjj5127 at 2012-04-17 19:58:31:
用植物提基因组试剂盒，液氮研磨的话一般来讲培养好的菌悬液需要多少呀

我没用过试剂盒，不好意思。
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14楼2012-04-17 22:13:02
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