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丝状真菌提取总DNA问题
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CTAB法提取真菌DNA最后用异丙醇沉淀后使用无菌水无法完全溶解沉淀，这事怎么回事？ [ Last edited by cclday on 2011-6-14 at 08:39 ] |
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【答案】应助回帖
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amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-14 19:00:12
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2.4.14.1真菌总DNA的提取 （1）接种菌株至液体培养基中，28℃，180rpm振荡培养3天； （2）用灭菌纱布过滤，并压干菌体； （3）将菌丝体倒入研钵（灭菌并预冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末状； （4）将粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液； （5）加等体积苯酚/氯仿，轻轻倒转混合，10000rpm离心10min； （6）取400µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重复步骤（5）； （7）取上清液，加入两倍体积无水乙醇，-20℃放置30min； （8）10000rpm 离心10min，75%乙醇洗沉淀2次，真空干燥； （9）以20µL 1×TE 溶解沉淀； （10）电泳检测总DNA的浓度。 （5）DNA抽提液的配置 表 2.5 DNA抽提液的配置 成分 浓度 NaCl 200mmol/L EDTA-Na2 4mmol/L SDS 2% Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L |
5楼2011-06-14 17:09:56
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6楼2011-06-14 17:11:22
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我对这个方法不了解，第一次听说，所以就查了一下，不敢说我查到的东西是真的或者是最好的，就说一下我的想法：这个方法太浪费时间了，单单是破碎细胞就要保温一个小时！而且操作也不比我用的方法简单，试剂也不省，实在不适合我用，但不是说不适合别人用。这些也只是我的想法，别人怎么看我就不知道了。 http://www.ceps.com.tw/ec/ecjnlarticleView.aspx?atliid=435190 |
10楼2011-06-15 17:03:09
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