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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » SDS 提取液如何配置
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海之子211

新虫 (小有名气)

[求助] SDS 提取液如何配置

SDS提取液(包括100mmol/L Tris-HCl(pH8.0)，50mmol/L EDTA，250mmol/L NaCl)
是不是按照1L溶液  算Tris-HCl   EDTA，NaCl 分子量   需要往溶液添加多少量就行，最后调pH
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1楼 2013-03-14 10:41:40
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gqstar

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
海之子211: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-03-14 13:04:38
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-03-14 15:17:07
Ｔｒｉｓ　ｈｃｌ EDTA　Ｎａｃｌ最好先配成高浓度母液，计算好，再按体积混合成需要浓度。
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回避型人格障碍
2楼2013-03-14 12:22:12
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海之子211

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gqstar at 2013-03-14 12:22:12
Ｔｒｉｓ　ｈｃｌ EDTA　Ｎａｃｌ最好先配成高浓度母液，计算好，再按体积混合成需要浓度。

那Tris-HCl  的pH=8，原来配Tris直接配成8？  那原液Tris的浓度是1mol和10mol用的酸是不一样
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3楼2013-03-14 13:04:15
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gqstar

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
海之子211: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-03-14 15:57:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by 海之子211 at 2013-03-14 13:04:15
那Tris-HCl  的pH=8，原来配Tris直接配成8？  那原液Tris的浓度是1mol和10mol用的酸是不一样...

分别调。
参考一下体系：
试验目的
1 明确提取液的配制原理
2 通过对提取液的配制，掌握提取液中各试剂在提取中的作用。
实验原理
DNA 是遗传物质, 植物DNA 的提取是植物基因工程的基础。通常要求所提取的DNA 要有理想的纯度,足够完整,无断裂降解,提取过程尽量少使用有毒化学品等。为了达到上述要求,已报道了不少提取植物DNA 的方法,归纳起来,主要有CTAB 法、SDS法和碱提取法。DNA分子是分子生物学研究的基本材料, 依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的DNA。因此提取液里试剂的配比也有所不同：植物DNA的抽提常采用CTAB方法：
配方如下：
1 配制提取液之前，先配制母液。
母液（灭菌）：5M NaCl ( 58.4g加ddH2O制成200ml溶液)
0.5M Na2-EDTA(37.22g+ddH2O至200ml,用NaOH调pH值为8.0)
1M Tris-HCl(12.11gTris-HCl+ ddH2O至100ml,用浓盐酸调pH值至8.0)
2 提取液配方
                                100ml
加入：CTAB粉剂                  2g        
       1M Tris(pH8.0)            10ml
       0.5M EDTA(pH8.0)          4ml
       5M NaCl                   28ml
       PVP                       1g  
  β-巯基乙醇                1ml
  加双蒸水定容至100ml
3  抽提液
分别量取苯酚、氯仿、异戊醇按25：24：1的体积比混合，再分别量取氯仿、异戊醇按24：1的体积比混合，配制成两种抽提液，各配制100ml
4   0.1xTE
1mlTris，20μl EDTA中加H2O, 用HCl调pH至8.0, 定溶，灭菌
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回避型人格障碍
4楼2013-03-14 13:10:04
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海之子211

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gqstar at 2013-03-14 13:10:04
分别调。
参考一下体系：
试验目的
1 明确提取液的配制原理
2 通过对提取液的配制，掌握提取液中各试剂在提取中的作用。
实验原理
DNA 是遗传物质, 植物DNA 的提取是植物基因工程的基础。通常要求所提取的D ...

我要从扇贝粪便中提取DNA，做pcr
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5楼2013-03-14 14:47:19
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海之子211

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gqstar at 2013-03-14 12:22:12
Ｔｒｉｓ　ｈｃｌ EDTA　Ｎａｃｌ最好先配成高浓度母液，计算好，再按体积混合成需要浓度。

Ｔｒｉｓ　ｈｃｌ的母液浓度是多少？这是固定值？
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6楼2013-03-14 15:56:15
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海之子211

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gqstar at 2013-03-14 13:10:04
分别调。
参考一下体系：
试验目的
1 明确提取液的配制原理
2 通过对提取液的配制，掌握提取液中各试剂在提取中的作用。
实验原理
DNA 是遗传物质, 植物DNA 的提取是植物基因工程的基础。通常要求所提取的D ...

Tris-HCl  的母液是固定1m？
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7楼2013-03-14 15:58:32
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gqstar

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhangxingc: 金币+8, 鼓励热心回帖应助 2013-03-15 12:58:45
引用回帖:
7楼: Originally posted by 海之子211 at 2013-03-14 15:58:32
Tris-HCl  的母液是固定1m？...

1mol/L
浓度。怕不对自己算一下。
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回避型人格障碍
8楼2013-03-14 17:33:29
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