| 查看: 1926 | 回复: 4 | |||
YongfengWang铁虫 (初入文坛)
|
[求助]
real time PCR能测定基因组内某一基因的拷贝数吗？
|
| real time PCR能测定基因组内某一基因的拷贝数吗？我怎么认为只能检测模版浓度？如果能测定基因的拷贝数，原理是什么，帮忙解释一下，坐等，谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有261人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
基因的拷贝数 持家基因 膜融合蛋白基因
已经有32人回复- real time PCR模板稀释问题
已经有4人回复
- 植物酶基因表达测定
已经有3人回复
- 请教基因拷贝数的单位及算法
已经有7人回复
- southern blot 确定基因拷贝数原理是什么？
已经有4人回复
- 求助！荧光定量PCR标准曲线制作至少要几个梯度
已经有6人回复
- 求助microRNA real time pcr结果分析
已经有4人回复
- 公布的基因组没有这个基因的注释，而用其他软件发现了这个基因，如何？
已经有4人回复
- 如何利用基因组DNA进行real time PCR ？？？？
已经有4人回复
- RT-PCR测定基因相对表达
已经有5人回复
- 环状基因组的PCR
已经有4人回复
- southern杂交检测基因拷贝数的原理是什么？
已经有19人回复
- 请教real time pcr问题，谢谢！
已经有10人回复
- 【求助/交流】寻找基因组序列中的单拷贝基因
已经有8人回复
- 【其他】为什么会有单拷贝基因呢？弱弱地问一下
已经有9人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR标准品制备及拷贝数计算
已经有3人回复
- 【求助/交流】在真菌基因组中PCR基因，难吗？
已经有18人回复
- 【专题】评价一下您用的Real-Time PCR仪器
已经有26人回复
- 【求助/交流】基因拷贝数的概念
已经有8人回复
- 【专题】real time pcr目的基因的融解曲线不明白
已经有8人回复
beautybanana
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 22
- 应助: 23 (小学生)
- 贵宾: 0.02
- 金币: 2973.8
- 散金: 5088
- 红花: 26
- 帖子: 1694
- 在线: 485.8小时
- 虫号: 1142157
- 注册: 2010-11-09
- 性别: GG
- 专业: 纳米生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
YongfengWang(金币+2): 好像忽然开窍了，测定时应该先测定基因组模版的质量浓度和含参照基因而不含目的基因的基因组模版质量浓度，我问题里说的应该是摩尔浓度，谢谢啦 2011-06-09 22:08:01
西瓜(金币+3): 鼓励交流，费心了哦。 2011-06-09 23:20:49
YongfengWang(金币+2): 好像忽然开窍了，测定时应该先测定基因组模版的质量浓度和含参照基因而不含目的基因的基因组模版质量浓度，我问题里说的应该是摩尔浓度，谢谢啦 2011-06-09 22:08:01
西瓜(金币+3): 鼓励交流，费心了哦。 2011-06-09 23:20:49
|
这个先要把基因组提取出来，然后把基因组做模板，对那个基因进行RT-PCR，如果所研究的某一基因的所有拷贝数都包含在基因组内的话，那么就可以确定原始的拷贝数，当然需要制作一个标准曲线的，（可以把那段基因当做定量的工具，先要准确定量好，浓度大一点的，就是说先定量一个ng级以上的标准模板，可以用紫外分光光度计或是nanodrop等仪器能够检测出的，然后梯度稀释，这样先制作成一个标准的曲线）这样可以根据RT-PCR的扩增Ct值代入到标准曲线里去求出拷贝数，当然模板要全部包含在基因组内。不知道我说的对不对，也就是你所说的实际上就是检测模板的浓度。 参看下RT-PCR原理看下啊 |
2楼2011-06-09 21:36:20
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
|
对您的看法持保留态度哦。 如果是两个不同的基因组，可以按照您的方法，把其中一个基因组的拷贝数看成1，另一个基因组与其进行比较（用比较Ct值法或者标准曲线的方法都可以）。但是楼主这里只有一个未知拷贝数的基因组，他的问题就等于是有待测样品，但是没有可以用于比较的标准品。 一般这种情况，应该先把目的基因克隆到质粒里面，然后用测OD260的方法可以测质粒浓度（也就知道了拷贝数，即copies/uL），再把质粒梯度稀释作为标准品，与样品基因组一起做实时荧光定量PCR（real-time PCR），梯度稀释的质粒可以做出标准曲线，这样就能知道样品基因组的拷贝数了。 质粒拷贝数可以这样计算： 质粒浓度（ng/uL）=OD260×50×稀释倍数 质粒分子量=碱基数×324 质粒拷贝数（copies/uL）=质粒浓度（ng/uL）÷质粒分子量×6×10^14（10的14次方） 个人意见，欢迎各位不吝赐教  |
3楼2011-06-09 23:37:05
beautybanana
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 22
- 应助: 23 (小学生)
- 贵宾: 0.02
- 金币: 2973.8
- 散金: 5088
- 红花: 26
- 帖子: 1694
- 在线: 485.8小时
- 虫号: 1142157
- 注册: 2010-11-09
- 性别: GG
- 专业: 纳米生物学
4楼2011-06-10 08:56:23
皇goo
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 11232.9
- 散金: 20
- 红花: 1
- 帖子: 983
- 在线: 157.5小时
- 虫号: 1140288
- 注册: 2010-11-06
- 专业: 脑血管结构、功能异常及相
5楼2012-08-31 09:21:03