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a71840584

金虫 (正式写手)

[求助] 植物酶基因表达测定 已有1人参与

我想做有毒物质，比如重金属对蚕豆幼苗的毒性影响，想测定一下其对蚕豆幼苗体内抗氧化酶SOD/CAT/POD基因表达的影响该怎么做呢。。是先提总DNA还是RNA，还是直接提目的基因片段，直接做DGGE看亮度？（不想做这个），还是扩增后再用RTPCR什么的测定。。能测出来含量嘛，就是最后能做个柱状图什么的表征下基因表达量的多少。。。
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
1楼 2014-03-04 18:34:23
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

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a71840584: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-19 19:54:55
最简单的思路，毒物处理后测ROS迸发及相关抗氧化酶活性，但这方面工作已经做烂了，只能算是个初步数据。Q-PCR检测相关酶转录水平，结合活性变化情况，可以推测毒物影响情况，再进一步设计接下来的实验。
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2楼2014-03-04 18:37:51
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a71840584

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-03-04 18:37:51
最简单的思路，毒物处理后测ROS迸发及相关抗氧化酶活性，但这方面工作已经做烂了，只能算是个初步数据。Q-PCR检测相关酶转录水平，结合活性变化情况，可以推测毒物影响情况，再进一步设计接下来的实验。

就是做烂了才不想做了啊，现在就是想做PCR检测相关酶基因的表达的影响，在原来的基础上延伸下，算是做点分子方面的吧，再下一步我们就不做了，我们就是评估某种化学物质的毒性，并不做有毒物质在体内的毒性机制..
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
3楼2014-03-04 19:37:49
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by a71840584 at 2014-03-04 19:37:49
就是做烂了才不想做了啊，现在就是想做PCR检测相关酶基因的表达的影响，在原来的基础上延伸下，算是做点分子方面的吧，再下一步我们就不做了，我们就是评估某种化学物质的毒性，并不做有毒物质在体内的毒性机制.....

那你查查文献看其他组做这方面工作时，通过哪些基因的转录水平变化说明问题，照着做个Q-PCR好了，也不用非得测几个抗氧化酶的转录水平。
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4楼2014-03-04 19:42:36
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