[交流] 重组蛋白聚集

Originally posted by thinkingers at 2011-06-08 17:20:31:
我做过重组降糖多肽的表达，浓缩的时候用的是透析袋，分子量不大，外面用分子量2W的聚乙二醇来吸水

透析除盐，怎么透析的？用超纯水、透析袋？是在哪个地方，比如透析袋内还是外中有白色絮状物？

Originally posted by 101202139 at 2011-07-08 15:30:26:
透析的过程中出现沉淀，原因有以下几种可能：
一、看看你重组蛋白的等电点是不是与你的透析液的pH值差不多，蛋白在等电点是很容易沉淀的。
二、你的蛋白浓度可能太大了，透析过程中，盐浓度的相对变化会造成盐析 ...

Originally posted by whb8161 at 2011-07-08 16:03:56:
加10%甘油试试

Originally posted by xuyihui2001 at 2011-07-08 16:28:17:
我建议加5%的甘油，蛋白可以梯度透析，即不要一次透析到目的盐溶液中，逐步降低透析袋外的盐浓度。

Originally posted by paulajjh at 2011-07-08 17:32:29:
我加了10%甘油，还聚沉，我一狠心，加了30%，现在正在做，可是感觉慢慢甘油都被透析出去了，不知道结果会怎样。

Originally posted by whb8161 at 2011-07-08 19:51:26:
那还是过脱盐柱吧，AKTA上半小时就能过完。
甘油浓度太高也不好，pH敏感吗？

Originally posted by paulajjh at 2011-07-09 08:34:06:
pH不敏感，现在也用了脱盐柱，脱盐效果还好，就是处理量太小，另外，脱盐后还是会出现聚沉的现象。
还得继续找原因。

Originally posted by whb8161 at 2011-07-09 09:29:51:
那可能说明你的蛋白依赖高盐，你脱盐的buffer盐浓度多高？如果太低建议提高buffer的盐浓度。另外，如果你做的是核里的蛋白，很多都是需要高盐的

15楼: Originally posted by paulajjh at 2011-07-09 11:12:48
核里的蛋白是什么概念？
我脱盐buffer盐浓度为100mM氯化钠，原始含500mM 氯化钠，500mM 咪唑。...