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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 重组蛋白聚集
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paulajjh

木虫 (著名写手)

[交流] 重组蛋白聚集

各位虫友，最近表达了一种人源的蛋白，在大肠中表达，采用亲和柱纯化后本打算超滤浓缩，然后透析除盐的，可是在超滤与除盐的过程中一直出现白色絮状物，我觉得有可能是蛋白聚集了，但我很担心，照这样聚集下去，酶活要全部没掉了。
各位如有出现过类似的现象，可否告诉我为什么会一直出现聚集的现象，如何防止这种聚集。
谢谢。
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1楼 2011-06-08 16:50:57
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101202139

铜虫 (小有名气)
★
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paulajjh(金币+2): 2011-07-08 15:54:41
透析的过程中出现沉淀，原因有以下几种可能：
一、看看你重组蛋白的等电点是不是与你的透析液的pH值差不多，蛋白在等电点是很容易沉淀的。
二、你的蛋白浓度可能太大了，透析过程中，盐浓度的相对变化会造成盐析。
另外蛋白沉淀了，活性还是有的，你可以加一些缓冲液进行溶解。
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6楼2011-07-08 15:30:26
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thinkingers

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+3): 鼓励分享经验 2011-06-08 20:27:43
paulajjh(金币+3): 谢谢 2011-06-09 10:35:55
我做过重组降糖多肽的表达，浓缩的时候用的是透析袋，分子量不大，外面用分子量2W的聚乙二醇来吸水

透析除盐，怎么透析的？用超纯水、透析袋？是在哪个地方，比如透析袋内还是外中有白色絮状物？
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2楼2011-06-08 17:20:31
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paulajjh

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by thinkingers at 2011-06-08 17:20:31:
我做过重组降糖多肽的表达，浓缩的时候用的是透析袋，分子量不大，外面用分子量2W的聚乙二醇来吸水

透析除盐，怎么透析的？用超纯水、透析袋？是在哪个地方，比如透析袋内还是外中有白色絮状物？

用透析袋除盐，里面为亲和柱后的液体，外面为低盐缓冲液，袋中有白色絮状物。
有一位同事说是没关系，继续透，透到平衡了就不再有聚集了，我透到今天为止，已经2天了，一直有白色絮状物出现。
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3楼2011-06-09 10:37:45
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dreamofyou

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
paulajjh(金币+3): 非常感谢,可否给我你师妹的联系方式? 2011-06-09 11:50:06
我师妹的一个蛋白就是透析会沉淀，然后她用脱盐柱除盐的，速度快，效果好～
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4楼2011-06-09 10:40:22
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