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paulajjh

木虫 (著名写手)


[交流] 重组蛋白聚集

各位虫友,最近表达了一种人源的蛋白,在大肠中表达,采用亲和柱纯化后本打算超滤浓缩,然后透析除盐的,可是在超滤与除盐的过程中一直出现白色絮状物,我觉得有可能是蛋白聚集了,但我很担心,照这样聚集下去,酶活要全部没掉了。
各位如有出现过类似的现象,可否告诉我为什么会一直出现聚集的现象,如何防止这种聚集。
谢谢。
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xuyihui2001

银虫 (正式写手)



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paulajjh(金币+3): 2011-07-08 17:32:55
我建议加5%的甘油,蛋白可以梯度透析,即不要一次透析到目的盐溶液中,逐步降低透析袋外的盐浓度。
9楼2011-07-08 16:28:17
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thinkingers

金虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3): 鼓励分享经验 2011-06-08 20:27:43
paulajjh(金币+3): 谢谢 2011-06-09 10:35:55
我做过重组降糖多肽的表达,浓缩的时候用的是透析袋,分子量不大,外面用分子量2W的聚乙二醇来吸水

透析除盐,怎么透析的?用超纯水、透析袋?是在哪个地方,比如透析袋内还是外中有白色絮状物?
2楼2011-06-08 17:20:31
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paulajjh

木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by thinkingers at 2011-06-08 17:20:31:
我做过重组降糖多肽的表达,浓缩的时候用的是透析袋,分子量不大,外面用分子量2W的聚乙二醇来吸水

透析除盐,怎么透析的?用超纯水、透析袋?是在哪个地方,比如透析袋内还是外中有白色絮状物?

用透析袋除盐,里面为亲和柱后的液体,外面为低盐缓冲液,袋中有白色絮状物。
有一位同事说是没关系,继续透,透到平衡了就不再有聚集了,我透到今天为止,已经2天了,一直有白色絮状物出现。
3楼2011-06-09 10:37:45
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dreamofyou

银虫 (小有名气)



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paulajjh(金币+3): 非常感谢,可否给我你师妹的联系方式? 2011-06-09 11:50:06
我师妹的一个蛋白就是透析会沉淀,然后她用脱盐柱除盐的,速度快,效果好~
4楼2011-06-09 10:40:22
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