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PCR没有结果
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| 本人要做构建表达载体，可是目的条带p不出来，引物是根据NCBI上已经公布的序列设计的编码区，说明引物应该是没问题的；模板可以p出其它基因，唯独目的基因p不出来，温度梯度40-70℃都试过了，模板梯度也试过了，都出不来，只有一次在57℃时出来了非常淡的条带，50ul体系电泳就跟平时5ul电泳结果差不多，割胶回收之后连接没成功，之后再怎么也p不出来了。请高手指教！！！很急啊！！！ |
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空谷幽风
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3楼2011-05-25 20:13:15
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2楼2011-05-25 19:52:36
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4楼2011-05-25 20:47:17
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我也想问同样的问题，最近在做RT和gene walking，这个基因根据NCBI上的序列设计引物，RT扩增出来过一次，测序有突变，有多个终止子出现，因为后面要对蛋白表达进行亚细胞定位，所以要想再再，但是之后就再也没有扩出来过，换过最近推荐比较好用的酶，同时换过引物之后，RT扩出800多的片段，本来是应该2900多，还是往下游做了一下，测序跟公布的cDNA 比对，这个前后完全匹配，就是中间完全缺失了2000多，望高人指点。 基因组长距离扩增，想先拿到一部分序列，再做walking，一步一步拿到完整的基因组序列，长距离扩增时，拿到一部分序列，约3000bp，但是之后walking一直没有结果，只是在点样孔出有东西，刚开始怀疑模板量多了，之后减少了模板量，但还是没有结果 |
5楼2011-06-07 16:24:21
