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融合蛋白在大肠杆菌中的表达，怎么被我越做越复杂了？已有5人参与
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刚入手做分子克隆的东西，导师给了个蛋白原核表达的实验，练练手。 主要就是找个蛋白的序列，连接到PET21中，在大肠杆菌表达体系中进行表达，并且用His-tag进行纯化。全序列都是公司合成的，并且还帮我连到了pet21上。第一次老师带着做的，第二次自己做的，纯化后得到的结果也不错。可是后来自己又表达了几次，都挂不上镍住了。再后来，做着做着，蛋白竟然不表达了，感觉特别匪夷所思。不过每次都是可溶表达，我还是挺有安慰的。大家有没有碰到类似的情况啊，求建议。 是不是我的原理没有搞清楚，但是感觉都是按照分子克隆上的操作进行的，而且每次自己不确定的都会问老师的。这个实验都做了半年了，越做越沮丧，蛋白的后续功能实验都还没进行呢。而且实验还是借别人的实验室做的，我都不好意思了。 哎，什么时候能看到希望呢，过来人给点鼓励吧。 |
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