24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wyhwawj_87

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 31.6
帖子: 25
在线: 6.7小时
虫号: 984087
注册: 2010-03-28
性别: GG
专业: 蛋白质组学

[交流] 求助原核表达WB 多条带已有5人参与

我用的是PET-28，在BL21中的表达，IPTG 0.5mM 诱导4h，菌体制样SDS-PAGE和WB,page胶考染没有差异条带，WB检测时却有多条带，并且比预计大（20kd》10kd）我换过载体和表达菌株都出现了这个问题！！请问大侠们是什么问题啊？？！！！

自己分析：我的片段含有多对二硫键，80个aa中含有24个CYS ,是否可能是二硫键太多形成了多聚体，多聚体之间又因为二硫键的断裂而形成大小不一的单体？？？

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有151人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

弱弱的问一句：原核表达 &Western blot 已经有6人回复
【求助】真核基因在原核生物表达已经有4人回复
【求助/交流】原核表达，预测的信号肽序列是否包括已经有7人回复
【求助】关于原核表达【有效日期截止：2011年2月28日】已经有7人回复
【求助/交流】酵母表达和原核表达，在技术上有什么不同？已经有6人回复
【求助/交流】原核表达羊基因，cDNA长度约为3kb，基因为一种有活性的酶已经有15人回复
【求助/交流】原核表达蛋白分子量偏大已经有17人回复
【求助/交流】原核表达去载体序列被翻译后该如何去掉已经有5人回复
【求助/交流】原核表达蛋白纯化已经有29人回复
【求助/交流】原核pET系统低温诱导表达菌体浓度太小怎么办？已经有7人回复
【求助/交流】原核表达载体pGEX-4T-1对应的表达菌株已经有6人回复
[求助]原核表达如何减少包涵体已经有23人回复

好想好想啊 ~~~

1楼2011-05-03 14:36:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wyhwawj_87

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 31.6
帖子: 25
在线: 6.7小时
虫号: 984087
注册: 2010-03-28
性别: GG
专业: 蛋白质组学

引用回帖:

Originally posted by lstt09nk at 2011-05-03 23:19:50:
你确定你的载体，你的序列没问题吗？
你的载体上没有连接了除了你的目的基因外的其他片段吗？
我们实验室曾出过这样的问题，自己的载体上海连接了其他的片段，结果表达出来的东西肯定是要大的啊，这种细节的东西 ...

我用的是HIS的鼠单抗，表达载体测序显示正确的~~~