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yucheng9255

木虫 (著名写手)


[交流] 两个引物只是3‘ 有两个碱基的差异,PCR能否增出特异条带

两个引物只是3‘ 有两个碱基的差异,PCR能否增出特异条带? 因为是一个突变基因,跟另一个基因只有两个碱基的差异,所以就把引物的3'端放在 突变的两个碱基上, 其他的碱基两个引物都一致,PCR克隆出来能否出来特异基因,另外PCR时有什么注意事项吗?望指点
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cst66276

银虫 (初入文坛)



yucheng9255(金币+1):谢谢参与
在看过的一篇文章里,就是这样区分SNP位点的。
3楼2011-05-01 10:22:39
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zycly86

铜虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-05-01 20:01:43
lstt09nk(金币+3): 感谢参与 2011-05-06 18:10:39
4楼2011-05-01 10:47:41
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地主的小长工

铜虫 (小有名气)



yucheng9255(金币+1):谢谢参与
PCR是魔鬼,我觉得这个不好说,只有P过才知道,退火温度好点,可能会好点吧…想问一下,这两个产物的大小也是一样得吗?如果不一样那还能分清呢
5楼2011-05-01 14:08:32
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zycly86

铜虫 (小有名气)


产物测序一下不就行了吗?
6楼2011-05-01 16:43:06
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gagalady

新虫 (正式写手)



yucheng9255(金币+1):谢谢参与
引物的3‘端有不配对的碱基,够呛能P出来,3’端的5个碱基最好完全配对,
7楼2011-05-01 16:48:18
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charster

新虫 (小有名气)


3' 的最后3个碱基,如果有两个不匹配,PCR效率就很低了
8楼2011-05-01 16:50:06
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★ ★ ★
yucheng9255(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-05-06 18:11:05
既然是两个基因,分开两个pcr 单独测序看一下就知道了。  不知道我理解的对不对。
9楼2011-05-01 17:56:57
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yucheng9255

木虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2011-05-01 17:56:57:
既然是两个基因,分开两个pcr 单独测序看一下就知道了。  不知道我理解的对不对。

我是这么想的
10楼2011-05-01 23:37:22
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呆米11

金虫 (小有名气)



yucheng9255(金币+1):谢谢参与
能P出来的可能性极小!
11楼2011-05-06 09:02:28
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haitian0625

金虫 (小有名气)



yucheng9255(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by cst66276 at 2011-05-01 10:22:39:
在看过的一篇文章里,就是这样区分SNP位点的。

嗯,我也见到过将引物设计在突变点鉴定SNP的
12楼2011-05-08 10:40:42
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zhhard

铜虫 (初入文坛)



yucheng9255(金币+1):谢谢参与
等位基因特异性PCR?
13楼2011-12-11 22:29:36
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Echo0508

新虫 (初入文坛)



yucheng9255(金币+1): 谢谢参与
我也遇到了和楼主一样的问题,不知道你的实验成功了没?求指点,谢谢~
14楼2012-11-19 14:55:36
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gcworm

木虫 (职业作家)


路过,帮你顶一下
15楼2012-11-19 17:25:48
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简单回复
6105098082楼
2011-05-01 09:38   回复  
yucheng9255(金币+1):谢谢参与
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