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ybQuan

金虫 (著名写手)

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[交流] 关于PCR的一些技术问题，欢迎交流！已有1人参与

最近用在做白蚁线粒体COI基因的扩增。开始用梯度检验引物的时候效果蛮好，确定了最佳的Tm值。但是之后按照这个体系再做扩增，有时候只有很暗的一条带，有时候就做不出来。用几个不同浓度的DNA模板去试验也是没有结果。这是什么问题？
一般DNA模板浓度在20ng的时候就可以做的出来，酶和dNTP的量也足够。
另外，10*buffer放在-20°保存，用的时候取出来解冻，放进冰箱再拿出来发现冻不上了，会不会失效了，可能是它影响了结果吗？

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【求助/交流】急!有关PCR中出现的一些问题,大家帮我看看啊! 已经有5人回复

哥在江湖漂，很少不挨刀，不是愿意挨，是哥很无奈!

1楼 2011-04-27 10:11:45

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-04-27 16:57:35

冻不上了应该有问题吧，reaction buffer没有那么多的甘油，应该是要冻上的

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