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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR的一些技术问题，欢迎交流！
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ybQuan

金虫 (著名写手)

[交流] 关于PCR的一些技术问题，欢迎交流！ 已有1人参与

最近用在做白蚁线粒体COI基因的扩增。开始用梯度检验引物的时候效果蛮好，确定了最佳的Tm值。但是之后按照这个体系再做扩增，有时候只有很暗的一条带，有时候就做不出来。用几个不同浓度的DNA模板去试验也是没有结果。这是什么问题？
一般DNA模板浓度在20ng的时候就可以做的出来，酶和dNTP的量也足够。
另外，10*buffer放在-20°保存，用的时候取出来解冻，放进冰箱再拿出来发现冻不上了，会不会失效了，可能是它影响了结果吗？
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哥在江湖漂，很少不挨刀，不是愿意挨，是哥很无奈!
1楼 2011-04-27 10:11:45
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love_st

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-04-27 16:57:35
冻不上了应该有问题吧，reaction buffer没有那么多的甘油，应该是要冻上的
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-04-27 12:38:50
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