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秋电工

新虫 (小有名气)


[交流] 同源性与进化树的矛盾

问题:分离到三个植物病原菌:1,2,3。在NCBI上blast后,结果分别为:1和欧文氏属某种同源性为98%,2和假单胞菌属某种同源性为98%,3和黄单胞菌属某种同源性为99%。再用mega 4.1构建进化树的时候,是1和2在一个分支里,bootstrapt 值为84,再和假单胞菌属构成另一个分支,bootstrapt 值为99。想请教一下,相似性更高的1和欧文氏属某种,2和假单胞菌属某种为什么不在一个分支里,这样的进化树和相似性比较是不是有矛盾,折腾半天也不大明白,请问各位看看怎么解释这种现象,谢谢!
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★ ★
秋电工(金币+1): 哦,哦,明白了 2011-04-26 16:34:33
scelab(金币+5, EPI+1): 很好很强大 2011-04-27 08:38:40
建MEGA树的话,alignment是必须的,align by clustalw之后,你会看到有些序列首尾并不是一致的,如下图1,要截成下面的样子,如图2;首尾多的序列都要去掉;
长枝吸引就是指,建树时,由于序列没有截成首尾一致,有几条序列可能由于碱基较多而得到的距离分值比短的大,尽管相似性不是最高的,但是也聚在了一起。举个简单的例子:
下面序列:
>1
AAAAAAAAAAAAAAAAA
>2
AAAAAC
>3
ACCCACCCCACCCAAC
一看就可以知道1和2近一些,但是由于1和3长度差不多,可能建树算分的时候,1和3得到的比分比1和2的大,那软件就会认为1和3近了……
可能还有一些更深层的原因,个有能力有限,仅知道这一点,书和文献的话,找系统发育中英文关键词都可以找到一些吧……
把相关区域剪开,再粘起来,就是拼序列吧,如果序列不是很多的话,你可以用复制粘贴搞定
9楼2011-04-26 16:03:36
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普通回帖

秋电工

新虫 (小有名气)


唉,木有人理了
2楼2011-04-25 13:26:29
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newtime007

木虫 (正式写手)


★
秋电工(金币+1):谢谢参与
不是太懂,帮你顶顶吧!
3楼2011-04-25 15:22:05
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)


★
秋电工(金币+1):谢谢参与
你是怎么知道同源性为98%和99%的?
4楼2011-04-25 16:44:13
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秋电工

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-04-25 16:44:13:
你是怎么知道同源性为98%和99%的?

禀xp198766,同源性是在NCBI中两两比对得出的
5楼2011-04-26 10:11:08
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)


★
秋电工(金币+5): 2011-04-26 15:24:55
wolfebst(金币+1): 鼓励交流 2011-04-26 15:48:19
NCBI的结果有相似度和覆盖度;
你做树的时候,有没有将序列首尾截齐,有没有可能出现长枝吸引,还有,我觉得使用不同的罚分矩阵,是不是也有影响……
6楼2011-04-26 11:12:36
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zhongfeng

铜虫 (初入文坛)


★
秋电工(金币+1):谢谢参与
看看是不是你的序列反向了,
7楼2011-04-26 11:13:12
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秋电工

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-04-26 11:12:36:
NCBI的结果有相似度和覆盖度;
你做树的时候,有没有将序列首尾截齐,有没有可能出现长枝吸引,还有,我觉得使用不同的罚分矩阵,是不是也有影响……

嗯,就是总分,相似度,覆盖率,国内很多文献都把最大相似度等同与同源性,没有考究其中科学性,也跟着这么说了。
序列首尾截齐?我也不知道我是否有做过这一步,在坛子里看见有师兄说mega4.0里整合了CLUSTAL,用mega4.0建的,Align by clustalW,这样算截过吗?
要是我这样不算截过,我应该用什么软件去截?截多少才算?
另外,呃,生性愚钝,您能解释下长枝吸引吗?隐隐觉得,这个很有可能。或者介绍本书或文献给我?昨天去邻校请教某博士,他说可能是保守区和可变区个数不一样,建议我把这两区域剪开,粘起来,再建树。非生物专业,该师兄建议实施起来有点举步维艰。
8楼2011-04-26 15:40:06
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)


秋电工(金币+1): 太感谢你了 2011-04-26 16:36:46
引用回帖:
Originally posted by 秋电工 at 2011-04-26 15:40:06:
嗯,就是总分,相似度,覆盖率,国内很多文献都把最大相似度等同与同源性,没有考究其中科学性,也跟着这么说了。
序列首尾截齐?我也不知道我是否有做过这一步,在坛子里看见有师兄说mega4.0里整合了CLUSTAL, ...

图片如下:



10楼2011-04-26 16:04:10
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秋电工

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-04-26 16:04:10:
图片如下:



敢问您这是用什么软件截的?
11楼2011-04-26 18:10:45
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
。。。。。我用是Jaview,装不了bioedit,用ubuntu自带的屏幕截图。。。
12楼2011-04-26 18:30:53
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秋电工

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-04-26 18:30:53:
。。。。。我用是Jaview,装不了bioedit,用ubuntu自带的屏幕截图。。。

哎呀,难为情,我没问清楚呢,不是说截图,我想试试把序列截齐后再建树看看,您用的是什么软件把序列截齐的?
13楼2011-04-26 18:40:44
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
bioedit蛮好用的,我觉得……
14楼2011-04-26 19:53:46
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秋电工

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-04-26 19:53:46:
bioedit蛮好用的,我觉得……

谢谢大牛XP!下了个bioedit7.0.9,也看到相关说明书,我的资质估计今晚参透它很难。明儿见老师,能不能偷个懒请XP告诉我截齐序列的步骤?很想看看这棵树到底是什么原因这么矛盾的.
15楼2011-04-26 20:25:48
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
scelab(金币+3): 谢谢热心回复 2011-04-27 08:39:39
不敢不敢,我只是看到别人这么用的,bioedit左上角,有一个选项,你设成edit,就可以编辑序列了,你先alignment,之后,就可以直接删除前后序列了,再保存就行了。。。很方便的,界面很友好
16楼2011-04-26 20:36:17
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秋电工

新虫 (小有名气)


★ ★
scelab(金币+2): 有问有答才能释疑解惑~~~ 2011-04-27 08:40:23
引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-04-26 20:36:17:
不敢不敢,我只是看到别人这么用的,bioedit左上角,有一个选项,你设成edit,就可以编辑序列了,你先alignment,之后,就可以直接删除前后序列了,再保存就行了。。。很方便的,界面很友好

谦虚了,您确实解释了我很多的疑惑。bioedit第一次用,把TXT格式序列导入进去后,select all,出现如下界面,请问alignment中那么多选项,应该是哪个呢?

17楼2011-04-26 23:05:43
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秋电工

新虫 (小有名气)


用Accessory application项下的ClustalW multiple alignment,比出来了,没有xp图片中的小色块。
首尾截序后,原来那个菌株与同源性高的仍然不聚在一起,是我截序没截对还是怎么了?
18楼2011-04-26 23:55:36
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 秋电工 at 2011-04-26 23:55:36:
用Accessory application项下的ClustalW multiple alignment,比出来了,没有xp图片中的小色块。
首尾截序后,原来那个菌株与同源性高的仍然不聚在一起,是我截序没截对还是怎么了?

我觉得是不是由于覆盖度不够啊,你看相似性的时候,还要看看下面的覆盖了多少个碱基,比如:
一个300bp的序列,前100bp与A相似性达100%,但是仅仅是100bp,后面的没有太高的匹配;但是前200bp与B相似性达95%,那建树结果可能就和B聚在一起了……
19楼2011-04-27 08:58:34
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秋电工

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 秋电工 at 2011-04-26 23:55:36:
用Accessory application项下的ClustalW multiple alignment,比出来了,没有xp图片中的小色块。
首尾截序后,原来那个菌株与同源性高的仍然不聚在一起,是我截序没截对还是怎么了?

呃,覆盖度显示98%呀!XP,谢谢你一直跟进啊!今天拿这棵树去见老师了,很不满,我也解释不出所以然。现在不知道该怎么办了。能不能把这个怪异的序列给你,你帮我看看到底是哪出问题了?
20楼2011-04-27 21:44:02
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秋电工

新虫 (小有名气)


人都过五一去了
21楼2011-04-29 18:34:48
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秋电工

新虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by zhongfeng at 2011-04-26 11:13:12:
看看是不是你的序列反向了,

谢谢!如果反向了用什么软件能顺过来呢?
22楼2011-05-03 09:32:50
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cellline

木虫 (正式写手)


学习了
23楼2011-05-17 23:14:44
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

24楼2012-04-27 23:35:43
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1554934楼: Originally posted by ghs25372216 at 2012-04-27 23:35:43:
用mega4的clustalw比对后,可以右击选中不需要的delete啊,还要用其他软件专门截吗?

恩,用很多方法都可以,我当时比较习惯bioedit,现在发现用MEGA 5也挺好的,bioedit对序列内部碱基的修改我觉得还是蛮方便的
25楼2012-04-28 11:35:21
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