24小时热门版块排行榜    

查看: 2435  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

amon7788

新虫 (初入文坛)

[求助] 外源蛋白诱导表达量特别少,求大侠解惑

本人研一,老板让我做一个蛋白的抗体,首先得将该蛋白外源诱导表达出来
我的目的基因大小是3600,目的蛋白大概130KD
用的载体是HisB,大约4400bp
酶连很顺利,开始用的是大肠JM109进行表达,0.5M的IPTG,37度诱导6小时
一跑胶发现有条带可是特别细,做了几次诱导效果都不怎么好
不知道到底是什么原因?难道因为外源片段太大了载体承受不了?或者宿主菌不对?诱导的条件需要改进?
求高人指点,不胜感激~~~·*——*
新人,没多少金币
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

花枝春满,天心月圆
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amon7788

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2011-04-19 14:20:02:
对啊,你应该用表达宿主BL21或其他
而且我觉得还要看你用的是什么vector

呵呵,BL21转了几次了都不长的,今天终于长了,准备试一试
载体是HISB,查了一下可以用JM109和BL21,不过也有很多人用TOP10的
花枝春满,天心月圆
7楼2011-04-19 17:58:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖


amon7788(金币+2): 谢谢!我已经换了TOP10,看看效果怎么样 2011-04-19 12:19:48
wolfebst(金币+1): 感谢回帖,回答的很好,呵呵 2011-04-19 12:34:36
超过100KDa的蛋白不是很好表达,可以试试不同的宿主。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2011-04-18 22:34:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖


wolfebst(金币+1): 感谢你回答 2011-04-20 15:57:08
引用回帖:
Originally posted by amon7788 at 2011-04-18 21:19:27:
本人研一,老板让我做一个蛋白的抗体,首先得将该蛋白外源诱导表达出来
我的目的基因大小是3600,目的蛋白大概130KD
用的载体是HisB,大约4400bp
酶连很顺利,开始用的是大肠JM109进行表达,0.5M的IPTG, ...

你换Top10做什么啊,这个是克隆宿主,不是表达宿主。。。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2011-04-19 13:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

对啊,你应该用表达宿主BL21或其他
而且我觉得还要看你用的是什么vector
5楼2011-04-19 14:20:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 17:31 by 4FFAWE8HcgUD
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 17:30 by 4FFAWE8HcgUD
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-29 17:22 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 面上意见出来了 +6 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 12/600 2026-08-29 17:20 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:13 by jCd0dEvKHShX
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 13:51 by jCd0dEvKHShX
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:51 by jCd0dEvKHShX
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:29 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 11:18 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见