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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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longytu

捐助贵宾 (正式写手)


[交流] 【求助】镍柱的纯化 已有2人参与

大家好,请看看附件中我的HIS标签蛋白纯化的结果正常吗?

1:请问,我的蛋白20mM的时候就出峰,是因为我的蛋白挂柱能力差,还是柱子过载?

2:75mM咪唑浓度时候,300mM咪唑浓度时候,都出现了尖峰,这是为什么呢?

3:我的三个梯度,20mM咪唑,75mM咪唑,300mM的咪唑浓度是否合适》?

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yunwalking

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
建议都跑个蛋白电泳看看 理论上20mM咪唑是洗杂  目的蛋白应该在后面2个峰里
爱我中华~
3楼2011-05-02 20:02:29
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
只是从图来看不能说明问题,比如说20mM的时候有些结合能力弱或者非特异性的蛋白结合,那么这个峰下面的蛋白可能纯度不是很高,300mM那里虽然也有峰,但是真正有效的部分很少,所以我的感觉是在75mM的应该是比较多。想进一步检测最好做个WB检测看看。至于条件的修改还需要看下WB的结果再说。拙建希望对你有用。
52187644
2楼2011-04-15 08:15:38
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