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longytu

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[交流] 【求助】镍柱的纯化已有2人参与

大家好，请看看附件中我的HIS标签蛋白纯化的结果正常吗？

1：请问，我的蛋白20mM的时候就出峰，是因为我的蛋白挂柱能力差，还是柱子过载？

2：75mM咪唑浓度时候，300mM咪唑浓度时候，都出现了尖峰，这是为什么呢？

3：我的三个梯度，20mM咪唑，75mM咪唑，300mM的咪唑浓度是否合适》？

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1楼 2011-04-14 20:21:57

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dianaofyezi

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只是从图来看不能说明问题，比如说20mM的时候有些结合能力弱或者非特异性的蛋白结合，那么这个峰下面的蛋白可能纯度不是很高，300mM那里虽然也有峰，但是真正有效的部分很少，所以我的感觉是在75mM的应该是比较多。想进一步检测最好做个WB检测看看。至于条件的修改还需要看下WB的结果再说。拙建希望对你有用。