| 查看: 2012 | 回复: 9 | |||
[交流]
【求助】pcr引物退火温度
|
|
各位大侠，小弟最近在做PCR,扩出的目的条带及其微弱，但杂带较亮。引物为以下 上游ATCCACGAGTACCATCATCTATGACTCCTTTAACTTTAG 下游GGCCTCGAGCCGTTAATTTTGTTTGATTTCAGCAT 请求帮助分析原因，并且求具体的退火温度，谢谢 [ Last edited by xuqingchun33 on 2011-4-7 at 21:47 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
上海工程技术大学张培磊教授团队招收博士生
已经有3人回复
-
上海工程技术大学【激光智能制造】课题组招收硕士
已经有5人回复
-
求助院士们，这个如何合成呀
已经有4人回复
-
临港实验室与上科大联培博士招生1名
已经有9人回复
-
想换工作。大多数高校都是 评职称时 认可5年内在原单位取得的成果吗？
已经有7人回复
-
需要合成515-64-0，50g，能接单的留言
已经有4人回复
-
自荐读博
已经有4人回复
-
写了一篇“相变储能技术在冷库中应用”的论文，论文内容以实验为主，投什么期刊合适？
已经有6人回复
-
带资进组求博导收留
已经有10人回复
-
最近几年招的学生写论文不引自己组发的文章
已经有11人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 上下游引物退火温度相差16℃， 是不是不能p出来啊
已经有6人回复
- 上下游引物退火温度相差16℃，
已经有4人回复
- 关于PCR退火温度
已经有17人回复
- PCR扩增产物电泳，退火温度优化
已经有19人回复
- 【求助/交流】这退火温度怎么算啊
已经有8人回复
- 【求助】PCR退火温度及时间如何确定
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR 的原理是啥啊
已经有20人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（一）
已经有20人回复
- 【求助/交流】引物长的话退火温度应该升高还是降低？
已经有6人回复
- PCR退火温度
已经有14人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
南京都市圈高校大龄离异博士征友
+2/526
-
山东农业大学韩福社教授团队招聘有机合成研究助理
+1/177
-
湖南师范大学医工交叉科研团队招收博士研究生
+1/176
-
好用的黑科技重组蛋白和生长因子
+1/98
-
Analytical Science Advances 持续征稿中
+1/81
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘
+1/79
-
中国海洋大学与中国水产科学研究院 联合培养 专硕 食品加工与安全
+1/79
-
最新看到一个观点：说高校教师的斩杀线是青基和面上
+1/73
-
坐标上海，93年诚征女友
+1/63
-
有南京的小伙伴吗，蹲个男朋友
+1/54
-
浙江师范大学申利国教授招聘博士后研究人员
+1/49
-
【AI、水文方向】香港科技大学（广州）研究助理招聘
+1/35
-
西南交通大学前沿院碳中和与物质循环利用课题组招收博士生
+1/35
-
浙江师范大学申利国教授招聘博士后研究人员
+1/30
-
【招生啦招生啦】武汉理工大学朱曼副研究员招收2026年9月入学博士/硕士研究生
+1/30
-
上海大学 力工学院 锂电池方向 博士研究生招生
+1/29
-
SCI，计算机相关可以写
+1/25
-
国家青年人才叶立群教授课题组招收2026级博士研究生
+1/10
-
中国科学院大连化学物理研究所DNL0902研究组招聘博士后和职工
+1/6
-
背单词居然坚持了888天
+1/1
2楼2011-04-07 23:38:41
3楼2011-04-07 23:52:42
4楼2011-04-08 09:28:42
5楼2011-04-08 09:49:36
6楼2011-04-08 10:26:09
xuqingchun33(金币+1): 2011-04-10 09:55:21
|
重叠PCR产物微弱是很正常的，而且在引物优化上也没有太大的余地。我们一般会再做一次PCR,以第一次引物的产物为模板，第二次PCR的引物往里退10多bp（一般10bp以上，长点没关系），这样第二次PCR就能得到特异的产物了。这个貌似叫做巢式PCR吧。 当然，这样的话，设计第一对引物时就要往外延一些了。第一次PCR产物，取10ul跑胶，看到有目的条带就行，有杂带也没关系。然后取5ul作为模板进行第二次PCR。 重叠PCR其他问题也可以问我。 [ Last edited by 西瓜 on 2011-4-8 at 11:28 ] |
7楼2011-04-08 10:42:40
8楼2011-04-08 13:33:55
9楼2011-04-08 13:34:40
10楼2011-04-08 14:58:17