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xuqingchun33

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助】pcr引物退火温度

各位大侠,小弟最近在做PCR,扩出的目的条带及其微弱,但杂带较亮。引物为以下
上游ATCCACGAGTACCATCATCTATGACTCCTTTAACTTTAG
下游GGCCTCGAGCCGTTAATTTTGTTTGATTTCAGCAT
请求帮助分析原因,并且求具体的退火温度,谢谢

[ Last edited by xuqingchun33 on 2011-4-7 at 21:47 ]
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-08 10:42:40:
重叠PCR产物微弱是很正常的,而且在引物优化上也没有太大的余地。我们一般会再做一次PCR,以第一次引物的产物为模板,第二次PCR的引物往里退10多bp(一般10bp以上,长点没关系),这样第二次PCR就能得到特异的 ...

重叠和巢式是不一样的哦~~~
9楼2011-04-08 13:34:40
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forrestgump

新虫 (著名写手)


只能换引物了,不过也得看你的目的了
要是做表达尽快换,要是克隆弱点无所谓了。
2楼2011-04-07 23:38:41
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楼主这引物还真是长啊……不是普通的PCR吧?说详细点吧。
3楼2011-04-07 23:52:42
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yabxxh

木虫 (正式写手)


请问你的PCR条件怎么样,前端TM66后端64,如果加了酶切位点,建议降低5度,5个循环,65度30个循环,没加酶切位点的话,直接65度30个循环,好运
4楼2011-04-08 09:28:42
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