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xuqingchun33

银虫 (小有名气)

应助: 6 (幼儿园)
金币: 393.5
帖子: 157
在线: 76.7小时
虫号: 918005

[交流] 【求助】pcr引物退火温度

各位大侠，小弟最近在做PCR,扩出的目的条带及其微弱，但杂带较亮。引物为以下
上游ATCCACGAGTACCATCATCTATGACTCCTTTAACTTTAG
下游GGCCTCGAGCCGTTAATTTTGTTTGATTTCAGCAT
请求帮助分析原因，并且求具体的退火温度，谢谢

[ Last edited by xuqingchun33 on 2011-4-7 at 21:47 ]

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1楼 2011-04-07 21:41:56

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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

BioEPI: 1
应助: 0 (幼儿园)
金币: 323.8
帖子: 166
在线: 35.8小时
虫号: 1032584

引用回帖:

Originally posted by 西瓜 at 2011-04-08 10:42:40:
重叠PCR产物微弱是很正常的，而且在引物优化上也没有太大的余地。我们一般会再做一次PCR,以第一次引物的产物为模板，第二次PCR的引物往里退10多bp（一般10bp以上，长点没关系），这样第二次PCR就能得到特异的 ...

重叠和巢式是不一样的哦~~~