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【求助】pcr引物退火温度
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xuqingchun33
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[交流]
【求助】pcr引物退火温度
各位大侠,小弟最近在做PCR,扩出的目的条带及其微弱,但杂带较亮。引物为以下
上游ATCCACGAGTACCATCATCTATGACTCCTTTAACTTTAG
下游GGCCTCGAGCCGTTAATTTTGTTTGATTTCAGCAT
请求帮助分析原因,并且求具体的退火温度,谢谢
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Last edited by xuqingchun33 on 2011-4-7 at 21:47
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2011-04-07 21:41:56
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引用回帖:
Originally posted by
xuqingchun33
at 2011-04-07 21:41:56:
各位大侠,小弟最近在做PCR,扩出的目的条带及其微弱,但杂带较亮。引物为以下
上游ATCCACGAGTACCATCATCTATGACTCCTTTAACTTTAG
下游GGCCTCGAGCCGTTAATTTTGTTTGATTTCAGCAT
请求帮助分析原因,并且求具体的退火温度 ...
如果是做重叠PCR,那么你的这个是中间的重叠引物嘛,貌似没有设计好哦,这对引物该是完全互补这样好做写的。
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2011-04-08 13:33:55
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forrestgump
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只能换引物了,不过也得看你的目的了
要是做表达尽快换,要是克隆弱点无所谓了。
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2011-04-07 23:38:41
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楼主这引物还真是长啊……不是普通的PCR吧?说详细点吧。
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3楼
2011-04-07 23:52:42
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请问你的PCR条件怎么样,前端TM66后端64,如果加了酶切位点,建议降低5度,5个循环,65度30个循环,没加酶切位点的话,直接65度30个循环,好运
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4楼
2011-04-08 09:28:42
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