应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】内参照条带分子量大小与预期不符
51/1返回列表
查看: 1377  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

waldenpond

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】内参照条带分子量大小与预期不符

我PCR后跑胶，目的产物的条带都很正常，但是内参照β-actin的条带却不正常。我用的β-actin分子量是330bp，但是跑出来的条带却还不到300bp,也就280-290左右。
请教大家这是为什么啊？
难道是我合成的引物有问题？还是我跑胶有问题，我跑了两次了啊，结果都是这样。
PS：这是我在NCBI上查到的我的β-actin信息，大侠们帮忙看一下对不对哈。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/sts/sts.cgi?uid=271688
UniSTS:271688 Links

PMC18465P1
Bos taurus locus ACTB
Mus musculus chromosome 5, locus Actb
Rattus norvegicus locus Actb

Found by e-PCR in sequences from Bos taurus, Cricetinae gen. sp., Cryptosporidium muris, Mus musculus, Plasmodium yoelii, Rattus norvegicus and Zea mays.

Primer Information


Forward primer: CGTGGGCCGCCCTAGGCACCA
Reverse primer: TTGGCCTTAGGGTTCAGAGGGG
PCR product size: 330 (bp), Mus musculus
330 (bp), Rattus norvegicus

[ Last edited by waldenpond on 2011-4-6 at 17:11 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-06 17:05:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waldenpond

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-06 17:11:03:
模板是cDNA吗？如果这样，有可能是设计引物时参照的是基因组DNA，中间有内含子，所以拿cDNA扩增时就比预期短了。纯属猜测。

有可能哈，我直接在NCBI上找的现成引物，也没注意是cDNA还是DNA。大侠高见，能不能帮忙再给看一下。
如果我设计引物时参照的是基因组DNA，那现在我做出来的结果还能不能用哈？还是需要另外设计引物？
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-06 17:14:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
waldenpond(金币+3): 2011-04-06 17:15:29
waldenpond(金币+3): 2011-04-06 17:16:06
模板是cDNA吗？如果这样，有可能是设计引物时参照的是基因组DNA，中间有内含子，所以拿cDNA扩增时就比预期短了。纯属猜测。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-06 17:11:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
waldenpond(金币+4): 2011-04-06 18:23:24
1949stone(金币+2): 鼓励 学习 2011-04-06 18:30:59
引用回帖:
Originally posted by waldenpond at 2011-04-06 17:14:22:
有可能哈，我直接在NCBI上找的现成引物，也没注意是cDNA还是DNA。大侠高见，能不能帮忙再给看一下。
如果我设计引物时参照的是基因组DNA，那现在我做出来的结果还能不能用哈？还是需要另外设计引物？

你那链接我没看懂……
我觉得是能用的。
你这PCR是做啥的？定量吗？
如果是半定量（跑胶直接比较条带亮度），那只要你的内参条带特异（只有一条带），且不同样品的内参条带亮度差不多，那就可以用。
如果是荧光定量PCR（实时定量PCR，real-time PCR），除了看跑胶条带是否特异，还得再看一看内参的融解曲线，只有一个特异的峰的话就没问题了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-04-06 17:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waldenpond

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-06 17:42:03:
你那链接我没看懂……
我觉得是能用的。
你这PCR是做啥的？定量吗？
如果是半定量（跑胶直接比较条带亮度），那只要你的内参条带特异（只有一条带），且不同样品的内参条带亮度差不多，那就可以用。 ...

好的，谢谢！
回复此楼
5楼2011-04-06 18:23:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +3 niko- 2026-03-22 3/150 2026-03-22 15:15 by 杨杨杨紫
[考研] 291 求调剂 +3 化工2026届毕业� 2026-03-21 3/150 2026-03-22 14:26 by ColorlessPI
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 070300化学319求调剂 +7 锦鲤0909 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:46 by JourneyLucky
[考研] 材料工程（专）一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 350求调剂 +5 weudhdk 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:04 by luoyongfeng
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 10/500 2026-03-19 14:31 by lemonzzn
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭