应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】内参照条带分子量大小与预期不符
51/1返回列表
查看: 1360  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

waldenpond

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】内参照条带分子量大小与预期不符

我PCR后跑胶，目的产物的条带都很正常，但是内参照β-actin的条带却不正常。我用的β-actin分子量是330bp，但是跑出来的条带却还不到300bp,也就280-290左右。
请教大家这是为什么啊？
难道是我合成的引物有问题？还是我跑胶有问题，我跑了两次了啊，结果都是这样。
PS：这是我在NCBI上查到的我的β-actin信息，大侠们帮忙看一下对不对哈。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/sts/sts.cgi?uid=271688
UniSTS:271688 Links

PMC18465P1
Bos taurus locus ACTB
Mus musculus chromosome 5, locus Actb
Rattus norvegicus locus Actb

Found by e-PCR in sequences from Bos taurus, Cricetinae gen. sp., Cryptosporidium muris, Mus musculus, Plasmodium yoelii, Rattus norvegicus and Zea mays.

Primer Information


Forward primer: CGTGGGCCGCCCTAGGCACCA
Reverse primer: TTGGCCTTAGGGTTCAGAGGGG
PCR product size: 330 (bp), Mus musculus
330 (bp), Rattus norvegicus

[ Last edited by waldenpond on 2011-4-6 at 17:11 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-06 17:05:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waldenpond

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-06 17:11:03:
模板是cDNA吗？如果这样，有可能是设计引物时参照的是基因组DNA，中间有内含子，所以拿cDNA扩增时就比预期短了。纯属猜测。

有可能哈，我直接在NCBI上找的现成引物，也没注意是cDNA还是DNA。大侠高见，能不能帮忙再给看一下。
如果我设计引物时参照的是基因组DNA，那现在我做出来的结果还能不能用哈？还是需要另外设计引物？
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-06 17:14:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
waldenpond(金币+3): 2011-04-06 17:15:29
waldenpond(金币+3): 2011-04-06 17:16:06
模板是cDNA吗？如果这样，有可能是设计引物时参照的是基因组DNA，中间有内含子，所以拿cDNA扩增时就比预期短了。纯属猜测。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-06 17:11:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
waldenpond(金币+4): 2011-04-06 18:23:24
1949stone(金币+2): 鼓励 学习 2011-04-06 18:30:59
引用回帖:
Originally posted by waldenpond at 2011-04-06 17:14:22:
有可能哈，我直接在NCBI上找的现成引物，也没注意是cDNA还是DNA。大侠高见，能不能帮忙再给看一下。
如果我设计引物时参照的是基因组DNA，那现在我做出来的结果还能不能用哈？还是需要另外设计引物？

你那链接我没看懂……
我觉得是能用的。
你这PCR是做啥的？定量吗？
如果是半定量（跑胶直接比较条带亮度），那只要你的内参条带特异（只有一条带），且不同样品的内参条带亮度差不多，那就可以用。
如果是荧光定量PCR（实时定量PCR，real-time PCR），除了看跑胶条带是否特异，还得再看一看内参的融解曲线，只有一个特异的峰的话就没问题了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-04-06 17:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waldenpond

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-06 17:42:03:
你那链接我没看懂……
我觉得是能用的。
你这PCR是做啥的？定量吗？
如果是半定量（跑胶直接比较条带亮度），那只要你的内参条带特异（只有一条带），且不同样品的内参条带亮度差不多，那就可以用。 ...

好的，谢谢！
回复此楼
5楼2011-04-06 18:23:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 yunziaaaaa 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:45 by 王兆江
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 11/550 2026-03-01 19:47 by 无懈可击111
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 0856调剂 +4 刘梦微 2026-02-28 4/200 2026-03-01 15:35 by 吸一口猫气
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭