应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】内参照条带分子量大小与预期不符
51/1返回列表
查看: 1391  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

waldenpond

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】内参照条带分子量大小与预期不符

我PCR后跑胶，目的产物的条带都很正常，但是内参照β-actin的条带却不正常。我用的β-actin分子量是330bp，但是跑出来的条带却还不到300bp,也就280-290左右。
请教大家这是为什么啊？
难道是我合成的引物有问题？还是我跑胶有问题，我跑了两次了啊，结果都是这样。
PS：这是我在NCBI上查到的我的β-actin信息，大侠们帮忙看一下对不对哈。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/sts/sts.cgi?uid=271688
UniSTS:271688 Links

PMC18465P1
Bos taurus locus ACTB
Mus musculus chromosome 5, locus Actb
Rattus norvegicus locus Actb

Found by e-PCR in sequences from Bos taurus, Cricetinae gen. sp., Cryptosporidium muris, Mus musculus, Plasmodium yoelii, Rattus norvegicus and Zea mays.

Primer Information


Forward primer: CGTGGGCCGCCCTAGGCACCA
Reverse primer: TTGGCCTTAGGGTTCAGAGGGG
PCR product size: 330 (bp), Mus musculus
330 (bp), Rattus norvegicus

[ Last edited by waldenpond on 2011-4-6 at 17:11 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-06 17:05:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waldenpond

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-06 17:42:03:
你那链接我没看懂……
我觉得是能用的。
你这PCR是做啥的？定量吗？
如果是半定量（跑胶直接比较条带亮度），那只要你的内参条带特异（只有一条带），且不同样品的内参条带亮度差不多，那就可以用。 ...

好的，谢谢！
回复此楼
5楼2011-04-06 18:23:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
waldenpond(金币+3): 2011-04-06 17:15:29
waldenpond(金币+3): 2011-04-06 17:16:06
模板是cDNA吗？如果这样，有可能是设计引物时参照的是基因组DNA，中间有内含子，所以拿cDNA扩增时就比预期短了。纯属猜测。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-06 17:11:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waldenpond

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-06 17:11:03:
模板是cDNA吗？如果这样，有可能是设计引物时参照的是基因组DNA，中间有内含子，所以拿cDNA扩增时就比预期短了。纯属猜测。

有可能哈，我直接在NCBI上找的现成引物，也没注意是cDNA还是DNA。大侠高见，能不能帮忙再给看一下。
如果我设计引物时参照的是基因组DNA，那现在我做出来的结果还能不能用哈？还是需要另外设计引物？
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-06 17:14:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
waldenpond(金币+4): 2011-04-06 18:23:24
1949stone(金币+2): 鼓励 学习 2011-04-06 18:30:59
引用回帖:
Originally posted by waldenpond at 2011-04-06 17:14:22:
有可能哈，我直接在NCBI上找的现成引物，也没注意是cDNA还是DNA。大侠高见，能不能帮忙再给看一下。
如果我设计引物时参照的是基因组DNA，那现在我做出来的结果还能不能用哈？还是需要另外设计引物？

你那链接我没看懂……
我觉得是能用的。
你这PCR是做啥的？定量吗？
如果是半定量（跑胶直接比较条带亮度），那只要你的内参条带特异（只有一条带），且不同样品的内参条带亮度差不多，那就可以用。
如果是荧光定量PCR（实时定量PCR，real-time PCR），除了看跑胶条带是否特异，还得再看一看内参的融解曲线，只有一个特异的峰的话就没问题了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-04-06 17:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +4 月@163.com 2026-04-11 4/200 2026-04-11 20:47 by may_新宇
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +18 ioodiiij 2026-04-08 18/900 2026-04-11 20:25 by liyun12321
[考研] 304求调剂（085602，过四级，一志愿985） +27 化工人999 2026-04-04 28/1400 2026-04-11 13:02 by 小晏唯
[考研] 化工求调剂！ +35 RichLi_ 2026-04-06 35/1750 2026-04-11 11:02 by zhq0425
[考研] 计算机11408，286分求调剂 +10 木子念晞 2026-04-05 10/500 2026-04-11 10:44 by zhq0425
[考研] 296求调剂 +7 汪！？！ 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:41 by zhq0425
[考研] 0854调剂 +4 长弓傲 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:18 by 猪会飞
[考研] 生物学308求调剂（一志愿华东师大） +6 相信必会光芒万� 2026-04-10 6/300 2026-04-11 05:23 by zhuwenxu
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +6 白云123456789 2026-04-09 8/400 2026-04-10 21:13 by zhouxiaoyu
[考研] 22408 366分，本科211，一志愿西工大 +4 Rubt 2026-04-09 4/200 2026-04-10 19:51 by chemisry
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 材料复试求调剂 +20 xhhdjdjsjks 2026-04-09 20/1000 2026-04-10 10:25 by 孙小小12457
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 264求调剂 +11 麦小叮当 2026-04-07 11/550 2026-04-08 16:05 by 一只好果子?
[考研] 计算机408｜在校多次国家级竞赛获奖｜申请调剂 +4 东山大白鹅 2026-04-05 4/200 2026-04-08 00:18 by chongya
[考研] 388求调剂 +6 四川王涛 2026-04-07 8/400 2026-04-08 00:17 by JourneyLucky
[考研] 计算机11408 287 求调剂 +3 LiLe5 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:15 by shanqishi
[考研] 331求调剂 +5 张元一 2026-04-07 6/300 2026-04-07 22:13 by hemengdong
[考研] 专硕085403，291分，有两篇专利，一国一奖 +3 哈吉咪哈吉咪 2026-04-07 3/150 2026-04-07 18:21 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭