24小时热门版块排行榜    

查看: 1203  |  回复: 6

szylnl

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】反转录

我提完总RNA之后,总RNA的效果很好,几乎没有降解,进行反转录,先是用的oligo dT 后用的随机引物,反转录出的cDNA,跑电泳,都没有条带,用这个cDNA进行PCR也没有条带,各位大侠说是反转录的问题呢?还是PCR引物的问题啊!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

65900931

银虫 (小有名气)


★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-04-01 20:11:01
szylnl(金币+3): 2011-04-25 16:19:30
找一个阳性对照,比如人家文献报道的好用的内参基因引物。
一般来说反转录出来的cDNA跑胶是很难看出来的,除非你投入的RNA量足够大。如果你设计的引物没有跨内含子区,可以用基因组PCR试试看,验证一下引物的扩增效率。
2楼2011-04-01 15:01:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)


szylnl(金币+2): 2011-04-25 16:19:40
反转录的cDNA是smear,如果量不大,电泳就看不见了
3楼2011-04-01 15:30:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

magy2006

木虫 (著名写手)


反转录后还是PCR一下检测比较好,电泳不是最佳检测方法……
4楼2011-04-01 15:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)


我都没拿cDNA没跑过胶哦,都是直接做PCR来验证cDNA的质量,不知道这样对不对?
5楼2011-04-01 17:22:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)


用内参基因PCR,同时设基因组对照就行了
6楼2011-04-01 17:27:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)


szylnl(金币+5): 2011-04-25 16:20:02
很显然这个是反转录的问题,确定试剂和操作方法都没问题的情况下,试一试随机引物吧,因为olig dt适用于polya结尾的mrna的反转录的,好运
7楼2011-04-02 09:31:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 szylnl 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 不应该看fileCode +6 且听虎啸 2026-08-12 8/400 2026-08-13 12:07 by 小木虫6752397
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 26/1300 2026-08-13 12:01 by Tide man
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +9 瞬息宇宙 2026-08-12 9/450 2026-08-13 10:12 by Vivilian
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见