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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】反转录
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szylnl

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】反转录

我提完总RNA之后，总RNA的效果很好，几乎没有降解，进行反转录，先是用的oligo dT 后用的随机引物，反转录出的cDNA，跑电泳，都没有条带，用这个cDNA进行PCR也没有条带，各位大侠说是反转录的问题呢?还是PCR引物的问题啊！！！
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1楼 2011-04-01 14:55:49
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65900931

银虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-04-01 20:11:01
szylnl(金币+3): 2011-04-25 16:19:30
找一个阳性对照，比如人家文献报道的好用的内参基因引物。
一般来说反转录出来的cDNA跑胶是很难看出来的，除非你投入的RNA量足够大。如果你设计的引物没有跨内含子区，可以用基因组PCR试试看，验证一下引物的扩增效率。
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2楼2011-04-01 15:01:49
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jasco

木虫 (正式写手)
szylnl(金币+2): 2011-04-25 16:19:40
反转录的cDNA是smear，如果量不大，电泳就看不见了
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3楼2011-04-01 15:30:22
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magy2006

木虫 (著名写手)
反转录后还是PCR一下检测比较好，电泳不是最佳检测方法……
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4楼2011-04-01 15:34:22
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sxxuan

金虫 (著名写手)
我都没拿cDNA没跑过胶哦，都是直接做PCR来验证cDNA的质量，不知道这样对不对？
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5楼2011-04-01 17:22:55
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zgb1982

木虫 (正式写手)
用内参基因PCR，同时设基因组对照就行了
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6楼2011-04-01 17:27:54
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yabxxh

木虫 (正式写手)
szylnl(金币+5): 2011-04-25 16:20:02
很显然这个是反转录的问题，确定试剂和操作方法都没问题的情况下，试一试随机引物吧，因为olig dt适用于polya结尾的mrna的反转录的，好运
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7楼2011-04-02 09:31:53
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