应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】反转录
71/1返回列表
查看: 1173  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

szylnl

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】反转录

我提完总RNA之后，总RNA的效果很好，几乎没有降解，进行反转录，先是用的oligo dT 后用的随机引物，反转录出的cDNA，跑电泳，都没有条带，用这个cDNA进行PCR也没有条带，各位大侠说是反转录的问题呢?还是PCR引物的问题啊！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-01 14:55:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

65900931

银虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-04-01 20:11:01
szylnl(金币+3): 2011-04-25 16:19:30
找一个阳性对照，比如人家文献报道的好用的内参基因引物。
一般来说反转录出来的cDNA跑胶是很难看出来的，除非你投入的RNA量足够大。如果你设计的引物没有跨内含子区，可以用基因组PCR试试看，验证一下引物的扩增效率。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-01 15:01:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
szylnl(金币+2): 2011-04-25 16:19:40
反转录的cDNA是smear，如果量不大，电泳就看不见了
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-01 15:30:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

magy2006

木虫 (著名写手)
反转录后还是PCR一下检测比较好，电泳不是最佳检测方法……
赞一下 回复此楼
4楼2011-04-01 15:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)
我都没拿cDNA没跑过胶哦，都是直接做PCR来验证cDNA的质量，不知道这样对不对？
赞一下 回复此楼
5楼2011-04-01 17:22:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
用内参基因PCR，同时设基因组对照就行了
赞一下 回复此楼
6楼2011-04-01 17:27:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)
szylnl(金币+5): 2011-04-25 16:20:02
很显然这个是反转录的问题，确定试剂和操作方法都没问题的情况下，试一试随机引物吧，因为olig dt适用于polya结尾的mrna的反转录的，好运
赞一下 回复此楼
7楼2011-04-02 09:31:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 szylnl 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭