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szylnl

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】反转录

我提完总RNA之后,总RNA的效果很好,几乎没有降解,进行反转录,先是用的oligo dT 后用的随机引物,反转录出的cDNA,跑电泳,都没有条带,用这个cDNA进行PCR也没有条带,各位大侠说是反转录的问题呢?还是PCR引物的问题啊!!!
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65900931

银虫 (小有名气)


★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-04-01 20:11:01
szylnl(金币+3): 2011-04-25 16:19:30
找一个阳性对照,比如人家文献报道的好用的内参基因引物。
一般来说反转录出来的cDNA跑胶是很难看出来的,除非你投入的RNA量足够大。如果你设计的引物没有跨内含子区,可以用基因组PCR试试看,验证一下引物的扩增效率。
2楼2011-04-01 15:01:49
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jasco

木虫 (正式写手)


szylnl(金币+2): 2011-04-25 16:19:40
反转录的cDNA是smear,如果量不大,电泳就看不见了
3楼2011-04-01 15:30:22
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magy2006

木虫 (著名写手)


反转录后还是PCR一下检测比较好,电泳不是最佳检测方法……
4楼2011-04-01 15:34:22
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sxxuan

金虫 (著名写手)


我都没拿cDNA没跑过胶哦,都是直接做PCR来验证cDNA的质量,不知道这样对不对?
5楼2011-04-01 17:22:55
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zgb1982

木虫 (正式写手)


用内参基因PCR,同时设基因组对照就行了
6楼2011-04-01 17:27:54
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yabxxh

木虫 (正式写手)


szylnl(金币+5): 2011-04-25 16:20:02
很显然这个是反转录的问题,确定试剂和操作方法都没问题的情况下,试一试随机引物吧,因为olig dt适用于polya结尾的mrna的反转录的,好运
7楼2011-04-02 09:31:53
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