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xiaojing459

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】求助:5.5KPCR片段连接难,请教!!

求助:我的片段约5.5 K, 连接到pGEM-T载体上,老是连接失败,挑不到阳性克隆,麻烦有经验的帮我想想办法,提些建议,多谢!
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bioxy

木虫 (初入文坛)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+5): good 2011-04-02 12:30:54
pGEM-T载体本身才3 kb,接近载体本身大小或者大于载体的片段连上的难度较大。如果实在连不上,你可以考虑在PCR引物上设计酶切位点加上保护碱基,PCR完成后做酶切连接。
13楼2011-04-02 09:19:25
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xiaojing459(金币+3):谢谢参与
看看 是不是犯了低级错误
2楼2011-03-31 21:27:57
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soarfalcon8808

铁杆木虫 (职业作家)



xiaojing459(金币+3):谢谢参与
可能操作上有点小问题
3楼2011-03-31 22:05:25
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★ ★ ★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-04-01 08:46:26
当时连过4K+的也没成功,不知道是不是T载承载能力不够的原因。
4楼2011-03-31 22:15:09
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