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xiaojing459

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3.5
帖子: 139
在线: 5.8小时
虫号: 301998

[交流] 【求助/交流】求助：5.5KPCR片段连接难，请教！！

求助：我的片段约5.5 K, 连接到pGEM-T载体上，老是连接失败，挑不到阳性克隆，麻烦有经验的帮我想想办法，提些建议，多谢！

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1楼 2011-03-31 21:09:08

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bioxy

木虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 2777.9
帖子: 44
在线: 149.6小时
虫号: 166746

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+5): good 2011-04-02 12:30:54

pGEM-T载体本身才3 kb，接近载体本身大小或者大于载体的片段连上的难度较大。如果实在连不上，你可以考虑在PCR引物上设计酶切位点加上保护碱基，PCR完成后做酶切连接。

赞一下(2人)

13楼2011-04-02 09:19:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 14 个回答

1949stone

荣誉版主 (知名作家)

★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与

看看是不是犯了低级错误

赞一下(1人)

2楼2011-03-31 21:27:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

soarfalcon8808

铁杆木虫 (职业作家)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8109.3
帖子: 4027
在线: 138小时
虫号: 775490

★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与

可能操作上有点小问题

赞一下(1人)

3楼2011-03-31 22:05:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-04-01 08:46:26

当时连过4K+的也没成功，不知道是不是T载承载能力不够的原因。

赞一下(2人)

4楼2011-03-31 22:15:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 14 个回答

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