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[交流]
【求助/交流】启动子给怎么弄---大肠杆菌做表达宿主 已有2人参与
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各位大虾好！ 我要表达一个33kb的片段，需要在前面加一个T7启动子（通过同源重组--RED重组），为了验证启动子是否加上，需要在启动子附近加个抗性标记。实在不知道给怎么办？ 应该是以下哪个顺序： 启动子--抗性基因--启动子--目的基因？ 启动子--抗性基因--目的基因？ 谢谢  |
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ls2046
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3楼2011-03-30 16:33:18
zhaohq1209
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-03-30 19:41:49
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看lz的意思是要在33kb基因的前面加T7启动子。 同时加入抗性标记的目的应该不是验证启动子是否加上，而是作为报告基因进行筛 选。 个人认为顺序可以是抗性基因-启动子-目的基因。理由如下： 1、启动子肯定在目的基因之前； 2、理论上抗性基因与启动子的位置可以随意，但二者应该相邻，否则失去筛选的意义。若抗性基因在启动子之后有可能会影响启动子之后目的基因的表达，比如发生移码突变等。 3、抗性基因在启动子之前可能会导致表达量低，但不用担心无法筛选。我曾经在基因注释的非编码区插入一个kan抗性基因，能筛选出来。 另外，据文献报道，插入的抗性基因一般为kan或cm。 祝lz好运。 |
2楼2011-03-30 13:24:46
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