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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌染色体插入位点
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xikexiao

禁虫 (小有名气)
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1楼 2013-07-04 15:29:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-05 09:22:20
如果要做表达，没有启动子的话表达水平会很低，一般是加强组成型启动子或者诱导启动子。插入位点应该选取不影响宿主的正常生长代谢的位置。一般可以通过同源重组的方式插入。
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2楼2013-07-05 08:36:53
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-05 09:22:25
xikexiao: 金币+4 2013-07-05 22:55:13
如果是想看这个基因的表达在大肠中的功能，建议先用质粒携带表达，当然肯定要加启动子的。毕竟质粒表达简单些。如果有表型，再整合到染色体上表达。整合时先找个位点，构建好同源臂，同源臂中间加启动子和你要表达的基因，然后通过同源重组将启动子和基因整合到染色体。
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3楼2013-07-05 09:20:03
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xikexiao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2013-07-05 14:30:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
xikexiao: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-07-05 22:55:02
引用回帖:
4楼: Originally posted by xikexiao at 2013-07-05 14:30:36
谢谢～受教了。整合的时候是将目的基因和抗生素基因连在一起电转入受体细胞，还是有什么别的方法？...

把目的基因和抗性基因放在两个同源臂直接，一起整合到染色体上。转化可以用电转化，也可以用熱激转化。
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5楼2013-07-05 16:11:51
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-05 16:11:51
把目的基因和抗性基因放在两个同源臂直接，一起整合到染色体上。转化可以用电转化，也可以用熱激转化。...

其他表达阅读框呢？RBS,RNA聚合酶等应该一起加进去吧？



电转化效率目前是否是最常用最有效的？

另外，选取的启动子是否在异源就有作用呢
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6楼2015-03-11 10:12:57
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fengjunchen

铜虫 (小有名气)
挖个坟……不知楼主后来表达体系搞定了没有？最近我也想在大肠杆菌里插个基因表达蛋白，不过不知道选什么整合型质粒好？选择哪个插入位点的表达量会高一些呢？
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7楼2015-07-23 10:54:58
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