应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 转座子插入随机突变如何保证单次插入？
81/1返回列表
查看: 2491  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看

quiller2000

木虫 (著名写手)

[求助] 转座子插入随机突变如何保证单次插入？

hi,大家好

偶以前没有做过这类工作，我想了解，在用Tn5转座子做随机插入突变体的时候，如何保证在抗性平板上分离出来的克隆是单一插入呢？

还有，在结合转移的时候，会不会第一个Tn5质粒进入受体菌后，发生一次转座插入后，这个细胞还会接受第二个Tn5质粒，从而发生第二次转座？

感谢各位！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
致良知
1楼 2012-06-27 23:57:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

chen5955227

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
scelab: 金币+5, MicEPI+1, 这个解释非常强大 2012-07-24 10:29:16
(1)Tn5转座子载体均为自杀性载体, 必须在特定的宿主中才能复制;   
(2) 转座区域带有可选择的抗生素抗性基因, 便于突变体的筛选;
(3) Tn5能抑制自身的转座, 保证在突变菌株上的单拷贝插入, 有利于突变性状的筛选;
( 4)转座子在插入位点留下一段已知DNA序列, 比传统的诱变方法更容易定位;
( 5) 由于转座酶不发生转座, 转座子在DNA 上稳定存在, 保证了突变性状的稳定。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-07-24 09:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

quiller2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chen5955227 at 2012-07-24 09:30:26
(1)Tn5转座子载体均为自杀性载体, 必须在特定的宿主中才能复制;   
(2) 转座区域带有可选择的抗生素抗性基因, 便于突变体的筛选;
(3) Tn5能抑制自身的转座, 保证在突变菌株上的单拷贝插入, 有利于突变性状的筛选 ...

感谢您的回复，但是您说的这些情况都是基于质粒只转入细胞一次的情况；有没有可能细胞接受一个转座子之后再接受一个转座子插入，或者同时接受了两个转座子插入呢？
赞一下 回复此楼
致良知
3楼2012-07-25 21:07:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chen5955227

铜虫 (初入文坛)
★
scelab: 金币+1, good 2012-08-10 21:27:13
引用回帖:
3楼: Originally posted by quiller2000 at 2012-07-25 21:07:27
感谢您的回复，但是您说的这些情况都是基于质粒只转入细胞一次的情况；有没有可能细胞接受一个转座子之后再接受一个转座子插入，或者同时接受了两个转座子插入呢？...

没能明白你的意思。。。对大多数细菌转座子而言, 它们的转座频率是相当低的, Tn5和Tn10分别为10-4、10-5，这样在一个经转座诱变的细胞群体中，双重转座频率低于10-10，所以双重突变体几乎是不存在的
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-26 10:08:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huichong

铁虫 (初入文坛)
各位，麻烦我想问一下，最近我想把我的一个质粒转到一个细菌的染色体上，想用这个Tn5酶，麻烦问一下有没有各位用过这个酶的，能不能教我一下这个该怎么做呀，
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-10 20:47:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chen5955227

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by huichong at 2012-08-10 20:47:15
各位，麻烦我想问一下，最近我想把我的一个质粒转到一个细菌的染色体上，想用这个Tn5酶，麻烦问一下有没有各位用过这个酶的，能不能教我一下这个该怎么做呀，

你好，你要做这方面的实验，应该多补充这方面的知识，不是要把质粒转到染色体上，Tn5也不是一种酶，国内利用Tn5的研究有很多，转化的方法也有很多，可用的转座子也有很多，根据你的细菌选择转化的方法，根据质粒及转座子特点选择筛选方法。。。我这不能上传文件，你可以下载一些国内的相关文献，有很多的，或者优秀硕士论文，照着学着摸索就行了。。。
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-14 10:00:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huichong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chen5955227 at 2012-08-14 10:00:38
你好，你要做这方面的实验，应该多补充这方面的知识，不是要把质粒转到染色体上，Tn5也不是一种酶，国内利用Tn5的研究有很多，转化的方法也有很多，可用的转座子也有很多，根据你的细菌选择转化的方法，根据质粒及 ...

同学你都用过什么转座子啊
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-16 15:17:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

farmer@

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chen5955227 at 2012-07-24 09:30:26
(1)Tn5转座子载体均为自杀性载体, 必须在特定的宿主中才能复制;   
(2) 转座区域带有可选择的抗生素抗性基因, 便于突变体的筛选;
(3) Tn5能抑制自身的转座, 保证在突变菌株上的单拷贝插入, 有利于突变性状的筛选 ...

你好，请问有没有Tn5这个转座子的序列呢？没有序列的话后续突变位点怎么定位呢？谢谢
我用的是Tn5-233这个转座子，在质粒pRK607上。
赞一下 回复此楼
8楼2013-06-08 12:27:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 quiller2000 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工考研调剂 +3 孅華 2026-03-22 3/150 2026-03-23 11:20 by barlinike
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +14 chaojifeixia 2026-03-19 15/750 2026-03-21 13:24 by zhukairuo
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭