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quiller2000

木虫 (著名写手)

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[求助] 转座子插入随机突变如何保证单次插入？

hi,大家好

偶以前没有做过这类工作，我想了解，在用Tn5转座子做随机插入突变体的时候，如何保证在抗性平板上分离出来的克隆是单一插入呢？

还有，在结合转移的时候，会不会第一个Tn5质粒进入受体菌后，发生一次转座插入后，这个细胞还会接受第二个Tn5质粒，从而发生第二次转座？

感谢各位！

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致良知

1楼2012-06-27 23:57:36

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farmer@

新虫 (初入文坛)

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专业: 微生物生理与生物化学

引用回帖:

2楼: Originally posted by chen5955227 at 2012-07-24 09:30:26
(1)Tn5转座子载体均为自杀性载体, 必须在特定的宿主中才能复制;
(2) 转座区域带有可选择的抗生素抗性基因, 便于突变体的筛选;
(3) Tn5能抑制自身的转座, 保证在突变菌株上的单拷贝插入, 有利于突变性状的筛选 ...

你好，请问有没有Tn5这个转座子的序列呢？没有序列的话后续突变位点怎么定位呢？谢谢
我用的是Tn5-233这个转座子，在质粒pRK607上。

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8楼2013-06-08 12:27:28

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