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xikexiao

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1楼 2013-07-04 15:29:17

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gywyl1977

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-05 09:22:25
xikexiao: 金币+4 2013-07-05 22:55:13

如果是想看这个基因的表达在大肠中的功能，建议先用质粒携带表达，当然肯定要加启动子的。毕竟质粒表达简单些。如果有表型，再整合到染色体上表达。整合时先找个位点，构建好同源臂，同源臂中间加启动子和你要表达的基因，然后通过同源重组将启动子和基因整合到染色体。

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3楼2013-07-05 09:20:03

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-05 09:22:20

如果要做表达，没有启动子的话表达水平会很低，一般是加强组成型启动子或者诱导启动子。插入位点应该选取不影响宿主的正常生长代谢的位置。一般可以通过同源重组的方式插入。

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2楼2013-07-05 08:36:53

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xikexiao

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4楼2013-07-05 14:30:36

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★
xikexiao: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-07-05 22:55:02

引用回帖:

4楼: Originally posted by xikexiao at 2013-07-05 14:30:36
谢谢～受教了。整合的时候是将目的基因和抗生素基因连在一起电转入受体细胞，还是有什么别的方法？...

把目的基因和抗性基因放在两个同源臂直接，一起整合到染色体上。转化可以用电转化，也可以用熱激转化。

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5楼2013-07-05 16:11:51

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