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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】怎么做都提不出DNA,请高手帮一下忙喽!!!! 已有23人参与

怎么做都提不出DNA,请高手帮一下忙喽!!!!
我是从青霉菌里提的,开始用的SDS法,液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后,12000离心10min,加两次氯仿:异戊醇(24:1)后离心10Min,12000收集上清,加等体积异丙醇-20放置30min以上,13500离心,用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的,结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法,(液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄,50℃,1h)做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了,结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下!!!

[ Last edited by 1949stone on 2011-4-21 at 12:54 ]
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zmw_520

禁虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 有理 2011-04-21 12:53:50
本帖内容被屏蔽

2楼2011-03-28 20:00:30
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河外生命

木虫 (小有名气)

★ ★
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1949stone(金币+1): 支持楼上 2011-04-21 12:54:04
说下实验细节,好让大家帮你分析
事在人为
3楼2011-03-28 21:39:19
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 鬼笔坏坏 at 2011-03-28 18:52:28:

回复:我是从青霉菌里提的,开始用的SDS法,液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后,12000离心10min,加两次氯仿:异戊醇(24:1)后离心10Min,12000收集上清,加等体积异丙醇-20放置30min以上,13500离心,用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的,结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法,(液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄,50℃,1h)做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了,结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下!!!
4楼2011-03-29 09:12:05
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by zmw_520 at 2011-03-28 20:00:30:
从哪里提,用的什么方法咧???

我是从青霉菌里提的,开始用的SDS法,液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后,12000离心10min,加两次氯仿:异戊醇(24:1)后离心10Min,12000收集上清,加等体积异丙醇-20放置30min以上,13500离心,用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的,结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法,(液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄,50℃,1h)做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了,结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下!!!
5楼2011-03-29 09:14:16
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 河外生命 at 2011-03-28 21:39:19:
说下实验细节,好让大家帮你分析

回复:我是从青霉菌里提的,开始用的SDS法,液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后,12000离心10min,加两次氯仿:异戊醇(24:1)后离心10Min,12000收集上清,加等体积异丙醇-20放置30min以上,13500离心,用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的,结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法,(液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄,50℃,1h)做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了,结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下!!!
6楼2011-03-29 09:14:44
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jjlbest

木虫 (著名写手)

★ ★
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1949stone(金币+1): 说说方法 2011-04-21 12:54:47
基因组提取关键是在于菌体的破裂,感觉楼主应该想办法破解细胞!
7楼2011-03-29 20:42:12
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另一个天堂

金虫 (小有名气)

★ ★
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1949stone(金币+1): 和楼上一样 2011-04-21 12:55:06
首先考虑是细胞破碎。如果没问题,可以用乙醇代替异丙醇沉淀DNA,沉淀时间延长
8楼2011-03-29 22:11:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+1): yes 2011-03-30 08:20:04
1949stone(金币+2): 白菜也好贵啊 2011-04-21 12:55:21
直接用kit提……现在提DNA的试剂盒都白菜价了
9楼2011-03-29 22:24:50
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by jjlbest at 2011-03-29 20:42:12:
基因组提取关键是在于菌体的破裂,感觉楼主应该想办法破解细胞!

我跑电泳的时候,里面有RNA的带,一点DNA都没有,可是只要有RNA出现是不是就是说破壁没问题啊?我用的缓冲溶液也是按好几篇文献一样我才配的,再麻烦给想一下!!!
10楼2011-03-30 15:36:30
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