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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
1949stone: 果然问题多多啊 2011-04-21 12:59:36
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-04-20 22:39:16:
两三天过去了，楼主提取得怎样了？

我很无语啊，有一个还有一点，我就做了PCR然后送去生工克隆测序了，其他的还是没有，做了PCR也没有，做出来的我也不明白是怎么蒙出来的，现在还有两株，现在还不知道怎么办，老师说以前他们做都会做出好多DNA来，为什么我做不出来啊？送去生工做600一个，关键是老师不同意。我很惆怅，所有的后续试验我都做完了，前边卡在这，好郁闷啊！！！
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31楼2011-04-21 12:43:53
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-04-20 23:15:15:
所以我认为苯酚应该加，除非有什么我现在还不知道的特殊要求。

我用苯酚来着啊，我想问一下，是不是我得试剂出问题了啊？？像苯酚氯仿要避光啊。什么的。我自己分析，既然有RNA就说我破壁没问题，问题就在DNA释放以后是不是溶解，还有就是在纯化上面了对吗。那第一步，在水浴以后离心的速度跟温度有没有很大的影响啊??4℃不会太低吧，不过后来我把温度调到20℃。


我真的很想很想很想看看你们是怎么做的，从来没看过别人做！！！！！
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32楼2011-04-21 12:53:56
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3): good 2011-04-21 18:44:34
饱和酚是要避光的，你在想，你有没有试一下照着我的方法做一次？各个步骤都严格按照我的，我觉得可能就成功了，要不然就只能再讨论了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
33楼2011-04-21 14:35:41
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
★ ★
西瓜(金币+2): 很好学！ 2011-04-21 17:08:53
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-04-21 14:35:41:
饱和酚是要避光的，你在想，你有没有试一下照着我的方法做一次？各个步骤都严格按照我的，我觉得可能就成功了，要不然就只能再讨论了。

好，我严格做一次！！
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34楼2011-04-21 16:38:50
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 很用心，说的很对！ 2011-04-21 18:45:15
引用回帖:
Originally posted by 鬼笔坏坏 at 2011-04-21 16:38:50:
好，我严格做一次！！

如果成功了，麻烦回帖说明是谁的方法有帮助哦。这样既是对回帖的虫虫最好的报答，也方便后人学习。
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35楼2011-04-21 17:09:07
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★
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有试剂盒嘛   感觉有的话应该能行
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36楼2011-04-21 21:05:23
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by linyingjia at 2011-04-21 21:05:23:
有试剂盒嘛   感觉有的话应该能行

没有试剂盒啊！！！说实话的，我还见过真的试剂盒长么样呢！！（严肃勿笑）
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37楼2011-04-21 21:26:08
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-21 17:09:07:
如果成功了，麻烦回帖说明是谁的方法有帮助哦。这样既是对回帖的虫虫最好的报答，也方便后人学习。

恩恩，会的，必须的
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38楼2011-04-21 21:26:43
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): 鼓励新虫交流 2011-04-22 17:28:59
你可以试着改变电泳条件，我曾经也有这样的问题，把胶的浓度提高，电压降低，试试。呵呵
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坚持，一秒钟，就离，成功，近一步！
39楼2011-04-22 12:41:16
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 感谢分享经验 2011-04-22 17:29:11
另外本人觉得试剂盒提DNA方便，可是提的量比较少，电泳没控制好的话，就会没有带。
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坚持，一秒钟，就离，成功，近一步！
40楼2011-04-22 12:43:14
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